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连接转化相关，求大神指教 已有4人参与
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最近在做一个载体构建，一直做不出来：目的基因和载体用了一个同尾酶（目的基因BgⅡ、载体BamHⅠ）另外一个是SpeⅠ,目的基因PCR出来后载体和目的基因分别双酶切，用的是NEB酶，酶切时间是两个小时，然后用体积1:4的比例连接1h涂板后没有长菌。之后又用同样的比例再连接，同时做一个比例为2:3的连接。第二天后者长了十几株菌，前者没有长菌。检菌没有检出阳性菌，但是我还是拿去测序了，测序后结果不对；同时还拿了个连接T载的质粒去测序，测序结果是对的。 表达可能不是很清晰，希望大神给我分析一下，非常感谢!! [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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