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张永婧1991

新虫 (初入文坛)

[求助] 高通量测序与T-RFLP的结合

本人做的是猪肠道微生物多样性,是个新手,有很多问题需要请问大师们。
1、做T-RFLP用通用引物扩增细菌组总DNA的保守区,然后酶切,根据片段数据库对比找到对应菌群,这个工作已经完成了,但疑问是发文章用数据库比对可靠吗?应该是要跟测序对比吧?那么问题又来了,我看零几年发的文章大多数就是用通用引物扩增保守区后克隆测序,拿回来的数据再找对应菌,这个测序是全序列测序吗?拿回来数据能跟酶切数据比对吗?现在用这个还能发好一点的文章吗?
2、导师想法是做个高通量测序,因为我们实验室以前没做过这方面的东西,弄得也是头大。我的问题就是,高通量测序应该测得都是可变区,得出结果后跟我酶切的保守区有什么内在联系呢?这两个方法能同时联系来说明多样性的问题吗?如果不做高通量,根据酶切所得的不是很可靠的结果,做定量PCR能验证吗?但是做多样性的话,定量需要定很多菌种吧?
好多问题啊,希望大神们能给多给点指点,感觉一入分子深似海,从此毕业是路人啊!
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