24小时热门版块排行榜    

查看: 3750  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

berry94

铁虫 (初入文坛)

[求助] 高GC含量目的基因的克隆 已有14人参与

大家好,我要克隆一个1.2K的目的基因,GC含量70%,克隆了很长时间了,一直没有什么进展,特地来向前辈们求助。个人认为RNA提取应该是很好的,一直觉着反转录得不好,我用的promega A5000的反转录试剂盒,48度、50度反转过,都没有扩出条带,做RACE也没有得到结果,所以希望有经验者提下意见,让晚辈进步!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

实验快快出结果
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

berry94

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lanhongxia at 2015-01-06 13:00:11
有专门用于高GC含量的酶,可以承受较高温度的变性,延伸温度而不失活,楼主可以试一下。

谢谢,我用另的primestar ,应该可以不?请问你觉得我的反转录42度对于高GC会不会有问题?
实验快快出结果
9楼2015-01-06 15:10:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

稻稻

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的什么酶?个人认为酶是关键

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
做一个不动声色的人,不准情绪化,不准回头看。
2楼2015-01-04 20:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:44:24
加点GC—buffer再做一下,GC含量高很难克隆的
3楼2015-01-05 09:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

berry94

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 稻稻 at 2015-01-04 20:40:19
用的什么酶?个人认为酶是关键

宝生物的primestar酶,我觉得我反转的效果可能不好,大侠觉得promega的A5000 48度能反转出我的cDNA吗
实验快快出结果
4楼2015-01-05 16:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 01:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:52 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 00:28 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见