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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高GC含量目的基因的克隆
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berry94

铁虫 (初入文坛)

[求助] 高GC含量目的基因的克隆 已有14人参与

大家好，我要克隆一个1.2K的目的基因，GC含量70%，克隆了很长时间了，一直没有什么进展，特地来向前辈们求助。个人认为RNA提取应该是很好的，一直觉着反转录得不好，我用的promega A5000的反转录试剂盒，48度、50度反转过，都没有扩出条带，做RACE也没有得到结果，所以希望有经验者提下意见，让晚辈进步！
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实验快快出结果
1楼 2015-01-04 18:40:37
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berry94

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lanhongxia at 2015-01-06 13:00:11
有专门用于高GC含量的酶，可以承受较高温度的变性，延伸温度而不失活，楼主可以试一下。

谢谢，我用另的primestar ，应该可以不？请问你觉得我的反转录42度对于高GC会不会有问题？
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实验快快出结果
9楼2015-01-06 15:10:34
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稻稻

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么酶？个人认为酶是关键

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
2楼2015-01-04 20:40:19
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小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:44:24
加点GC—buffer再做一下，GC含量高很难克隆的
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-05 09:12:45
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berry94

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 稻稻 at 2015-01-04 20:40:19
用的什么酶？个人认为酶是关键

宝生物的primestar酶，我觉得我反转的效果可能不好，大侠觉得promega的A5000 48度能反转出我的cDNA吗
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实验快快出结果
4楼2015-01-05 16:53:34
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