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lu12306

新虫 (初入文坛)

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[求助] 半定量RT-PCR中的引物二聚体已有2人参与

最近在做半定量RT-PCR，从cDNA中能批出目的基因和内参基因，但胶的下面会有引物二聚体。我想问一下做半定量RT-PCR实验是不是得要求没有引物二聚体？引物二聚体会影响结果吗？如果有影响是不是只能重新设计引物？谢谢大家的解答啦！

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1楼2014-12-29 21:34:44

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lu12306

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引用回帖:

4楼: Originally posted by lu12306 at 2015-01-05 10:55:11
谢谢你的答复。

我发现如果我在PCR仪升到72度以上再放样进去，引物二聚体会少很多。很开心！

...

你好！我还想问一下：1.我做不同组织的半定量，还需要摸索不同组织的最佳循环数吗？ 2.同管扩增的话，是将PCR体系乘以2倍吗？3.我扩增的目的基因约1000bp，是不是太大？对结果有影响？有人建议做300-500bp的。这有硬性要求吗？4.你觉得我这个18SrRNA的最佳循环数应该是多少？怎么确定的？