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linxiaolin08捐助贵宾 (初入文坛)
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关于基因和质粒连接后质粒大小问题已有2人参与
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| 最近我在做目的基因与28a质粒双酶切后连接，连接后转化提取质粒，发现质粒的构型改变了，我的基因1100bp，加上28a质粒应该是6500bp左右，正常跑电泳应该在超螺旋Marker中间最亮的那条带之上，但是我跑出来的图片是在那条带之下。我还是酶切验证了，结果居然是有目的基因条带切出来....我想问一下基因跟质粒连接后会造成质粒的超螺旋更加超螺旋么？我只能想出这么一个理由了...那会影响蛋白表达么？ |
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-26 16:49:20
linxiaolin08: 金币+5 2015-01-05 08:58:22
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| 放心吧，楼主，不会让你的质粒更加超螺旋的。首先，解释一下为什么插入目的基因以后为什么条带更向下了。重组质粒是不是没有酶切而直接跑的电泳？如果是的话，那就对了。因为超螺旋的质粒跑的位置会比实际大小偏向下一点。还有就是，就算是重组质粒你单酶切了，跑的位置也不一定就跟你的marker完全对应，我遇见过。遇到这种情况，我建议楼主继续往下做，酶切验证以后，测序看看。希望能够有用。 |
2楼2014-12-25 20:29:39