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su-qiong

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒大小变小!求帮解答~ 已有2人参与

原来的质粒大小有5033bp,用SphI和KpnI分步酶切后(先用KpnI切,再用SphI切),用T4连接酶与目的片段1809bp(也用这两个酶酶切过)进行连接。之后进行转化。做菌液PCR时能P出目的条带,提质粒,电泳验证后发现质粒大小变成4000多bp。为什么质粒大小变小了,但又能PCR出目的条带呢???求解答。谢谢!
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nbadlq

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

酶切了吗,有目的条带吗。我最近做连接转化也出现了这种问题,重组质粒小于原质粒,探索中
3楼2015-10-26 16:58:03
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1205yli

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

同求,为什么原始质粒比重组质粒跑得还慢
2楼2015-04-30 16:00:05
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小秀子子

新虫 (初入文坛)

我最近用SphI和KpnI酶切质粒5400bp和目的片段1431bp,用T4连接酶进行连接,之后转化,板长得很正常,但是菌液PCR时不能P出目的条带,已经重复好几次了,是否有什么高见?
4楼2016-03-21 15:23:32
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