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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR绝对定量的标曲问题
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2013201621

铁虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR绝对定量的标曲问题已有1人参与

最近在做绝对定量，土壤样品细菌和真菌的丰度。关于标曲的问题，克隆测序正确，提完质粒（标准质粒，用于制作标曲）以后，到底要不要将质粒酶切线性化啊？我认为没有必要，可是看到一些论坛里有人说要酶切，以至于现在做的时候总感觉有点没搞清楚到底要不要酶切啊。有在做的虫友纠结这个问题吗？求指点~~~~
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FIGHTING
1楼2014-12-14 11:18:27
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做过，没有线性化，我觉得没必要，我直接质粒做的，R2还可以。之前看有的paper说需要线性化，有的文章又说没影响，线性化后反而不稳定了。
楼主原核和真核都用的什么引物啊，有空能交流交流么？
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3楼2014-12-14 20:05:59
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

16S我一开始我也想扩V3区的，用的338F和518R，但是效果不好，后来改用V1区的，效果还好。R2=0.9921.扩增效率的算法是10（-1/斜率）-1.。。。。。。括弧里面为指数。
但是我ITS扩的线性很烂。
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6楼2014-12-16 10:29:32
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