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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有什么载体可以大量表达分子量大的可溶性蛋白
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GZHXbio

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 胡晓凤 at 2014-12-12 09:14:58
我试过了，没有用，还是大量包涵体...

你的基因的来源是什么，或者他因为糖基化的原因，不能够活性表达。另外，你试试在N端加入Trx或者其他助溶性标签，也会有帮助。
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11楼2014-12-12 10:06:48
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xiaochong8693

木虫之王 (文坛精英)
祝福，真心希望楼主心想事成
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12楼2014-12-12 10:20:22
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胡晓凤

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by GZHXbio at 2014-12-12 10:06:48
你的基因的来源是什么，或者他因为糖基化的原因，不能够活性表达。另外，你试试在N端加入Trx或者其他助溶性标签，也会有帮助。...

我的基因来源于原核一种致病杆菌。我试下可溶性蛋白标签吧
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13楼2014-12-12 16:51:14
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ddtao

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能否建议您用
9Arg-4His-9Arg-4His-5cystine-4His-9Arg-4His-9Arg  
国内已有生产
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14楼2014-12-13 16:25:39
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我实验室用pPIC9k和pPICZa，也是分泌蛋白，也挺大的，Za表达的蛋白都130kDa了。不过是毕赤酵母表达。

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15楼2014-12-14 08:17:59
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胡晓凤

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ggyy0911 at 2014-12-14 08:17:59
我实验室用pPIC9k和pPICZa，也是分泌蛋白，也挺大的，Za表达的蛋白都130kDa了。不过是毕赤酵母表达。

酵母表达是不是有专门的真核表达系统呀？怎么做纯化呢？
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16楼2014-12-17 19:34:01
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by 胡晓凤 at 2014-12-17 19:34:01
酵母表达是不是有专门的真核表达系统呀？怎么做纯化呢？...

对，因为我们要表达的蛋白结构比较复杂。纯化你可以选不同的标签，有的载体上自带，有的可以在引物上加，这部分应该和原核载体差不多。或者不用标签，看你的蛋白决定怎么纯化。

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17楼2014-12-18 20:46:36
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xiangqin90

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，你是用什么载体做的小量诱导呢？我现在蛋白大小72kD，表达一直没有诱导现象，诱导条件又是怎样的？不胜感激呀
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想要做的更好
18楼2015-07-10 12:15:52
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仁者努力

铁虫 (正式写手)
pcold-tf
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加油
19楼2015-07-10 13:52:12
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