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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点突变
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狮子山下君

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
snowbabe_洛(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-12 20:19:12
snowbabe_洛: 金币+1 2014-12-25 19:21:36
自己设计引物，引物最好有十个碱基重复互补，你的引物长度可以长一点，大概30-40bp 都可以，一步突变后用用去甲基化化酶Dpn1处理之后，直接转化，就可以了吧！我也不清楚你具体做的什么，不知道能不能帮到你！

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2014-12-12 18:18:27
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再闹不给糖

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实就是用引物来实现这个突变的，你这只是一个位点的突变，好做，我做的7个碱基突变，那才恼火，做了几个月，一直没效果
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天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过
12楼2014-12-12 22:35:56
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wshi85

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你片段不长的话，找个公司，几百就搞定了！省的自己麻烦！
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很久没在虫虫上漂游了，觉得回归虫虫！
13楼2014-12-14 17:07:49
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gao19890724

铁虫 (小有名气)
解决了吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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14楼2014-12-16 22:16:12
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snowbabe_洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-10 14:25:45
这个应该是全式金的定点突变试剂盒，给你推荐一个在线软件设计工具试试吧，链接：http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi；
还有一个在线网站适合上海生工的定点突变试剂盒的突变引物设计工具： ...

你好， 我用这个在线软件设计得到的结果和说明书的格式不一样呢。。。我不懂这些，麻烦指点下
定点突变
NCSUTM~GS[46T[UVHGNI4LN.png
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15楼2014-12-23 15:11:19
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
snowbabe_洛: 金币+2 2014-12-24 16:04:51
snowbabe_洛: 金币+1 2014-12-25 19:21:47
引用回帖:
15楼: Originally posted by snowbabe_洛 at 2014-12-23 15:11:19
你好， 我用这个在线软件设计得到的结果和说明书的格式不一样呢。。。我不懂这些，麻烦指点下

NCSUTM~GS[46T[UVHGNI4LN.png
...

从他们试剂盒的原理来说，是重叠PCR的方法进行突变PCR反应的，他们给的例子只是部分重叠，你设计的引物是完全重叠，影响不大，采用你设计的引物合成一对试试看，我觉得只要你能扩增出来，一般是可以成功突变的
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snowbabe_洛
rainwater
16楼2014-12-24 10:26:40
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snowbabe_洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 再闹不给糖 at 2014-12-12 22:35:56
其实就是用引物来实现这个突变的，你这只是一个位点的突变，好做，我做的7个碱基突变，那才恼火，做了几个月，一直没效果

我也要做突变，要让蛋白活性更高，位点都不知道怎么选，突变成哪个也不知道。。。
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17楼2014-12-25 19:14:32
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snowbabe_洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 狮子山下君 at 2014-12-12 18:18:27
自己设计引物，引物最好有十个碱基重复互补，你的引物长度可以长一点，大概30-40bp 都可以，一步突变后用用去甲基化化酶Dpn1处理之后，直接转化，就可以了吧！我也不清楚你具体做的什么，不知道能不能帮到你！
...

就是不会设计呢。合成的重组质粒，然后过程中有两个点突变了，现在要把突变掉的再变回去。。。
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18楼2014-12-25 19:16:03
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snowbabe_洛

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-24 10:26:40
从他们试剂盒的原理来说，是重叠PCR的方法进行突变PCR反应的，他们给的例子只是部分重叠，你设计的引物是完全重叠，影响不大，采用你设计的引物合成一对试试看，我觉得只要你能扩增出来，一般是可以成功突变的...

恩，最近忙着写文章，还没空做，下周试试看，谢谢你。
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19楼2014-12-25 19:17:30
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snowbabe_洛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by wshi85 at 2014-12-14 17:07:49
你片段不长的话，找个公司，几百就搞定了！省的自己麻烦！

就要研究通过定点突变来提高蛋白活性呢，以后要经常做的，得学会啊。
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20楼2014-12-25 19:19:18
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