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目的基因和表达载体连接不上，求指导！！！ 已有3人参与
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我的目的基因2.2k，送去公司直接合成的。合成后的目的基因连接在puc57载体上，质粒大小为4.9k，其中目的基因2.2k，puc57载体本身2.7k。以质粒为模板进行pcr，胶回收目的片段，然后双酶切（bamh1和ecor1）目的片段和表达载体pyes2（5.9k），连接，转化。平板顺利长菌了，菌落pcr结果为阳性，提质粒酶切以后，却惊奇的发现两条带的大小约为2.2k和2.7k！！！！质粒竟然是最初的“目的基因+puc57载体”，而不是自己想要的“目的基因+pyes2载体”！！！全是假阳性，没有我想要构建的质粒，why？！！！ 我明明已经切胶回收了，按说不应该污染这么多当时pcr做模板的质粒啊，新手上路，求大家指导！ |
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2楼2014-12-08 14:48:56
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6楼2014-12-09 08:23:10
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