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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 载体构建
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xzy0425

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体构建 已有4人参与

请问虫友们，在构建重组载体时，拿到原始环状质粒，除了要看酶切位点，还要考虑什么问题？请具体说说，谢谢！！！！！！！！！！！！！！跪求
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1楼 2014-12-02 19:04:55
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:57:41
1.搞清楚你是要构建什么载体
2.看看你构建这个载体需要的外源基因、载体是什么
3.考虑如何获得外源基因、载体
4.从第3步的考虑出发，分析载体以及外源基因所在质粒的酶切位点等
5.如果是表达蛋白，那就更要慎重，不要突变、移位等等，如果是RNAi，就无所谓了。
6.其余的楼上说的很好，我只是作下补充，祝好。
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11楼2014-12-04 11:28:03
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 19:25:15
看是否有标签，结合你的实验目的看需要如何设计实验

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-12-02 19:23:06
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coolkid2001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-12-04 19:25:44
载体抗性。
另外，像pcDNA3.1这种真核表达载体，如果基因起始位置满足kozak序列规则，蛋白翻译效率会显著提高。
每个载体都有其说明书的，建议楼主仔细阅读。
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一入江湖岁月催
3楼2014-12-02 21:46:05
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wushm388

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xzy0425: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 19:26:01
质粒图，最好有目的基因序列。用之前双酶切实验检验，然后就可以进行后续实验了。
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4楼2014-12-03 14:26:59
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