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wlh太阳花

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助求组,纯菌和PCR方面的问题,希望大家进来帮我分析分析,万分感谢 已有3人参与

我养的是细菌,涂板是单菌落,PCR用的引物是27f、1492r,PCR照胶只有目的条带,一点杂带也没有,可是PCR产物测序回来,1492r测序成功,27f测序结果是杂合,我送了几个样,几乎都是这样,这是什么原因,我想知道,涂板是单菌落能证明我的菌是纯菌吗?  我挑单菌落  菌不长,所以我每次都只能用菌保里的菌养。我也不知道我这个菌挑菌为什么不长。。。小女子真是一点办法都没有啦,麻烦各位亲 帮帮我吧
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jingquan

铜虫 (正式写手)

你仔细看涂片电镜,有时候,个别视野看着是单个菌,但是整个片子是否也是。确定是纯菌了。PCR产物最好回收后连接载体送去测序。这样用通用引物从载体开始测,直接产物开始的碱基峰会很乱的。
5楼2014-12-02 12:11:25
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多划几次单克隆,直到得到单菌落。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-11-30 19:20:58
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wlh太阳花

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-11-30 19:20:58
多划几次单克隆,直到得到单菌落。

涂板一直是单菌落  划线也是单菌落
3楼2014-11-30 20:59:14
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wlh太阳花 at 2014-11-30 20:59:14
涂板一直是单菌落  划线也是单菌落...

在单菌落的基础上多次划单菌落,优化pcr体系。一般细菌只有一个16s,不太会出现这种情况。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-11-30 21:14:10
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