| 查看: 4007 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
克隆基因克隆不出来，请各位老师同学看看什么问题。 已有4人参与
|
||
|
各位老师好，本人今年研一，做的是同源基因克隆。师兄从NCBI查找的序列，设计了12对引物（12个功能结构域相似的基因），我用各种处理的（高温，低温，乙醇，盐）CDNA模板跑pcr，一共只有4对引物跑出了条带，但是大都与查找的序列不对应，我使用的是诺唯赞的mix酶。 回收条带后连接pud19-T载体，过夜培养后挑出单克隆，拿去测序，比对率都在25%左右。 不只是哪里出现了问题，跑PCR的时候就是按照师兄给的条件跑的：94 3min ;94 30s, 55 30s, 72 2min(30循环);4 正无穷。 第一次发帖，也没什么经验，不知道说清楚没有，金币也没多少，所以还请各位老师同学见谅，帮帮我！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有243人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 克隆目的基因的问题
已经有15人回复
- 一个基因做TA克隆后送去测序，不同的单克隆后来结果不一致，1500bp里有的11个碱基不同
已经有9人回复
- 克隆基因为什么一直连不到载体上
已经有11人回复
- 求助分子克隆问题——挑不出阳性克隆！
已经有14人回复
- T载体克隆做不出来，求帮助
已经有24人回复
- 基因克隆失败原因，求助！
已经有10人回复
- 基因克隆转化表达遇到问题，求大神解答
已经有14人回复
- T-A克隆一直做不出来
已经有28人回复
- 长片段基因3.9K克隆不出来，求助
已经有43人回复
- 克隆做不出来，求帮助
已经有19人回复
- 已知基因序列，要用PCR克隆该基因，模板从哪里来？
已经有13人回复
- 克隆基因，挑克隆拿去测序，好多点突怎么办！？
已经有21人回复
- 如何根据保守序列将基因片段克隆出来
已经有16人回复
- 我有几个克隆和基因重组的基本问题不太清楚，请各位帮帮忙！
已经有6人回复
- 我做的基因克隆，平行的几个克隆测序后，片段比对重叠率怎么不是100%
已经有5人回复
- Ebook__《基因克隆和DNA分析》第四版中文版
已经有422人回复
- 求助-基因克隆及引物设计的问题
已经有6人回复
- 单个基因的克隆和表达可以发在什么杂志上
已经有4人回复
- 克隆过程出现的问题
已经有7人回复
- 基因克隆问题~~
已经有5人回复
- 【求助/交流】基因做表达实验必须要克隆全长吗？
已经有7人回复
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案
已经有17人回复
- 【求助/交流】已知基因序列如何克隆获得
已经有18人回复
9楼2014-11-25 17:06:40
zshw_001
金虫 (小有名气)
- 应助: 77 (初中生)
- 金币: 506.4
- 帖子: 171
- 在线: 27.6小时
- 虫号: 1151714
- 注册: 2010-11-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2014-11-24 17:00:24
3楼2014-11-24 17:40:10
4楼2014-11-24 20:24:37
