| 查看: 4979 | 回复: 14 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
小T在努力！木虫 (小有名气)
|
[求助]
急求农杆菌Gv3101 感受态制备方法。 已有4人参与
|
||
| 如题，步骤最好详细点，第一次做完全没经验。如果觉得金币不够再加好吗？急求！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有278人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 农杆菌培养及制备感受态
已经有4人回复
- 请问哪个公司有卖农杆菌GV3101感受态呢？正规的，好一点的公司？
已经有5人回复
- 请问有人将氨苄抗性的表达载体转入农杆菌吗？用的是哪种农杆菌呀？
已经有16人回复
- 天根公司感受态 可以拿来做菌种 自己制作感受态吗？
已经有4人回复
- 植物表达载体及农杆菌菌株
已经有4人回复
- 细菌抗生素抗性诱导
已经有4人回复
- 请问摇菌后的菌液怎么保存，谢谢
已经有10人回复
- 感受态制备及转化
已经有4人回复
- 农杆菌GV3101摇菌的时候加什么抗生素啊
已经有10人回复
- 【求助/交流】农杆菌GV3101
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教高手：做农杆菌感受态OD值摇到0.985，能用吗？
已经有14人回复
- 【分享】农杆菌感受态制备和转化方法
已经有19人回复
- 【求助/交流】求农杆菌培养基配方
已经有4人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小T在努力！(myprayer代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-23 12:36:14
小T在努力！: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-11-23 15:41:53
感谢参与，应助指数 +1
小T在努力！(myprayer代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-23 12:36:14
小T在努力！: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-11-23 15:41:53
|
实验试剂 利福平，LB培养基，NaCl，CaCl2，YEP培养基，卡那霉素 实验设备 摇床，高速离心机，低温冰箱，水浴锅 实验材料 根癌农杆菌GV3101单菌落 实验步骤 1. 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 1) 挑取单菌落GV3101，接种于5mL附加有50mg/L的利福平的液体LB培养基中，28℃，200rpm，过夜； 2) 取2mL培养物至50mL液体LB培养基中，继续培养至OD600为0.5左右； 3) 将培养物冰浴30min，4℃，5000rpm，离心5min，弃上清； 4) 用l0mL 0.lmol/L冷的NaCl悬浮菌体； 5) 4℃，5000rpm，离心5min，弃上清； 6) 1 mL 20mmo1/L冷的CaCl2悬浮，分装成50uL/管，液氮速冻后，-80℃保存。 2. 冻融法转化农杆菌 1) 冰浴融化农杆菌LBA4404/GV3101感受态细胞； 2) 加入3ul表达载体质粒，冰浴30min，液氮中冻1 min，然后在37℃水浴5min； 3) 加入950uL无抗生素的YEP培养基，28℃，200rpm，振荡培养4h； 4) 1 0000rpm离心1 min以浓缩菌液，用100uL YEP回溶菌体； 5) 将回溶后的菌体涂于附加50mg/L卡那霉素和100mg/L利福平的固体YEP培养基上，28℃培养36-48h。菌液PCR检测阳性克隆 [ 发自小木虫客户端 ] |
7楼2014-11-23 07:27:59
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-11-22 12:08:22
小T在努力！
木虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1205.1
- 散金: 134
- 红花: 1
- 帖子: 204
- 在线: 73.1小时
- 虫号: 3155760
- 注册: 2014-04-22
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2014-11-22 12:53:32
小T在努力！
木虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1205.1
- 散金: 134
- 红花: 1
- 帖子: 204
- 在线: 73.1小时
- 虫号: 3155760
- 注册: 2014-04-22
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
4楼2014-11-22 21:05:36
