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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3‘race 求助
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青青雨季

新虫 (初入文坛)

[求助] 3‘race 求助 已有2人参与

最近一直做3‘race ，没有用试剂盒，是自己设计好的引物，结果就像图片这样没有条带，反转录的结果用保守区的引物验证过了，可以用，但3‘race用了很多方法结果都是这样，大家帮分析分析，我已经没办法了
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1楼 2014-11-17 14:09:20
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
青青雨季(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:13:55
我也是这样，最近做的也是跑不出来，模版也没问题，内参也跑的出来，但是就是没有条带。我问了好多师兄师姐，都说在换个引物试试，我的引物设计的还是不错的，但是我没有用嵌套跑，师姐喊我用嵌套试试。同时3'端的引物也要有启动的接头才能启动，就是在一大堆T后面加个接头，这个可以买试剂盒，就是有些贵，貌似5次还是10次要一万多
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2楼2014-11-17 14:46:43
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青青雨季

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2014-11-17 14:46:43
我也是这样，最近做的也是跑不出来，模版也没问题，内参也跑的出来，但是就是没有条带。我问了好多师兄师姐，都说在换个引物试试，我的引物设计的还是不错的，但是我没有用嵌套跑，师姐喊我用嵌套试试。同时3'端的引 ...

接头我也有，巢式PCR也做了，降落PCR也做了，就是没条带，实在不行就只能换引物了
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3楼2014-11-17 19:21:06
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 青青雨季 at 2014-11-17 19:21:06
接头我也有，巢式PCR也做了，降落PCR也做了，就是没条带，实在不行就只能换引物了...

引物温度最好相差不要超过正负1度，我觉得3‘应该不是很难，和5’相比，不过祝你好运吧
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4楼2014-11-18 10:46:11
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青青雨季

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2014-11-18 10:46:11
引物温度最好相差不要超过正负1度，我觉得3‘应该不是很难，和5’相比，不过祝你好运吧...

嘿嘿，我的3‘做完了，重新设置了个降落pcr出来了，谢谢
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5楼2014-11-19 15:15:11
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z604253372

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
青青雨季(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-08 16:39:13
楼主，你做3‘RACE测序后，有没有在3’端缺失碱基？我前段时间做的3'RACE，与同源基因比对后3‘端缺失了100bp的序列。5‘RACE测序有两种结果，一个是与同源基因一样，一个是比同源基因在5’端多了20bp的序列，甚是奇怪。不知道有没有虫友出现过类似情况。
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6楼2014-12-03 09:36:34
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青青雨季

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by z604253372 at 2014-12-03 09:36:34
楼主，你做3‘RACE测序后，有没有在3’端缺失碱基？我前段时间做的3'RACE，与同源基因比对后3‘端缺失了100bp的序列。5‘RACE测序有两种结果，一个是与同源基因一样，一个是比同源基因在5’端多了20bp的序列，甚是奇 ...

我的3‘没有缺，你的A尾还在吗？5'还没有做了
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7楼2014-12-08 15:44:00
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