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青青雨季

新虫 (初入文坛)

[求助] 3‘race 求助 已有2人参与

最近一直做3‘race ,没有用试剂盒,是自己设计好的引物,结果就像图片这样没有条带,反转录的结果用保守区的引物验证过了,可以用,但3‘race用了很多方法结果都是这样,大家帮分析分析,我已经没办法了
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
青青雨季(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:13:55
我也是这样,最近做的也是跑不出来,模版也没问题,内参也跑的出来,但是就是没有条带。我问了好多师兄师姐,都说在换个引物试试,我的引物设计的还是不错的,但是我没有用嵌套跑,师姐喊我用嵌套试试。同时3'端的引物也要有启动的接头才能启动,就是在一大堆T后面加个接头,这个可以买试剂盒,就是有些贵,貌似5次还是10次要一万多
2楼2014-11-17 14:46:43
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青青雨季

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2014-11-17 14:46:43
我也是这样,最近做的也是跑不出来,模版也没问题,内参也跑的出来,但是就是没有条带。我问了好多师兄师姐,都说在换个引物试试,我的引物设计的还是不错的,但是我没有用嵌套跑,师姐喊我用嵌套试试。同时3'端的引 ...

接头我也有,巢式PCR也做了,降落PCR也做了,就是没条带,实在不行就只能换引物了
3楼2014-11-17 19:21:06
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 青青雨季 at 2014-11-17 19:21:06
接头我也有,巢式PCR也做了,降落PCR也做了,就是没条带,实在不行就只能换引物了...

引物温度最好相差不要超过正负1度,我觉得3‘应该不是很难,和5’相比,不过祝你好运吧
4楼2014-11-18 10:46:11
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青青雨季

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2014-11-18 10:46:11
引物温度最好相差不要超过正负1度,我觉得3‘应该不是很难,和5’相比,不过祝你好运吧...

嘿嘿,我的3‘做完了,重新设置了个降落pcr出来了,谢谢
5楼2014-11-19 15:15:11
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z604253372

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


青青雨季(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-08 16:39:13
楼主,你做3‘RACE测序后,有没有在3’端缺失碱基?我前段时间做的3'RACE,与同源基因比对后3‘端缺失了100bp的序列。5‘RACE测序有两种结果,一个是与同源基因一样,一个是比同源基因在5’端多了20bp的序列,甚是奇怪。不知道有没有虫友出现过类似情况。
6楼2014-12-03 09:36:34
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青青雨季

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by z604253372 at 2014-12-03 09:36:34
楼主,你做3‘RACE测序后,有没有在3’端缺失碱基?我前段时间做的3'RACE,与同源基因比对后3‘端缺失了100bp的序列。5‘RACE测序有两种结果,一个是与同源基因一样,一个是比同源基因在5’端多了20bp的序列,甚是奇 ...

我的3‘没有缺,你的A尾还在吗?5'还没有做了
7楼2014-12-08 15:44:00
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