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[求助]
求设计荧光定量PCR引物一对（SYBGREEN) 已有1人参与
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各位大神，最近需做荧光定量，求设计引物一对，我会选取几对引物进行试验，然后把结果反馈给大家。 上引物模板：ATGTATCACC CGCAGTGCGA GCTCCTGACG ATGGCGCACG AAACGCCGGA CCTGGACGCC 61 GGCCAGCCGC ACCTAACCGT CTCCGGCGTC GCCAGCATCC CGGCAGAGCT GAGCTTCCAC 121 CTGCTGCACT CGCTCGACGC CGCGGCGGCG GTCAATCCCG TCACGGCGCC GCCGCAGTCC 181 ACCATCGACT ACTTCCTCGG CGGCGCCGAT CCCCACCAGC AGGCCATGCA GTACGAGCCG 241 CTGCCGCCCG CCGCGGGCGG CCACCACCAG TACACCATGG ACATGTTCCG CGACTACTGC 301 GACGGCAACT ACCCCACCGC CGAGCCGTAC ATCCGCGGGA CAATGACTGG AGCCCTCGTG 361 TTCGGGGCCA CCGACGACGA CGACTCGGCC GCTGCCGCCT ACATGCCCGG GGGGCACTTT 421 GAGACCTCCC CGCCGCCGCC ACGCGCCACC GGCCGCGGCA GGAAGCGGGG CAGGGCGCTG 481 GGCGGCGGCT TCCATGCTGT GCTGGCCAAC GGCGTCGAGA AGAAGGAGAA GCAGCGCCGG 541 CTGCGGCTCA CCGAGAAGTT TACGGCCCTC ATGCACCTCA TACCCAACGT TACGAAG 下引物模板： ACT 601 GATAGGGCGA CGGTGATCTC GGACGCGATC GAGTACATCC AGGAGCTGGG GAGGACGGTG 661 GAGGAGCTGA CGCTGCTGGT GGAGAAGAAG CGGCGCCGGA GGGAGCTGCA GGGGGACGTC 721 GTGGACGCGG CGCCGGCTGC GGTGGTTGCT GCCGCCGGTG AGGCGGAGAG CTCGGAGGGC 781 GAGGTGGCTC CTCCGCCGCT GGCCGTGCCG CGGCAGCCGA TCCGGAGCAC GTACATCCAG 841 CGGCGGAGCA AGGACACGTC CGTGGACGTG CGGATCGTGG AGGAGGACGT GAACATCAAG 901 CTCACCAAGC GCCGGCGCGA CGGGTGCCTC GCAGCCGCGT CGCGCGCGCT GGACGACCTC 961 CGCCTTGACC TCGTCCACCT CTCCGGCGGC AAGATCGGTG ACTGTCAAAT CTACATGTTC 1021 AACACCAAGA TTCACAAGGG GTCTTCAGTG TTTGCGAGTG CAGTGGCCGG TAGGCTGATG 1081 GAAGTGGTGG ACGAGTACTA G |
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3楼2014-11-12 11:00:35
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-12 11:21:55
generalel: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2014-11-13 10:28:29
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做荧光定量没必要限定位置吧？看表达就行，给楼主设了几对引物： （1）F:TTCAACACCAAGATTCACAAG (TM=60.8) R:GTCCACCACTTCCATCAG(TM=61.2) (2) F:ATGTTCAACACCAAGATTCAC(TM=60.9) R:GTCCACCACTTCCATCAG(TM=61.2) (3) F:GTCCACCACTTCCATCAG(YM=62.2) R:ACCACTTCCATCAGCCTAC(TM=63) 你先试试，不同的引物表达量可能有一点点差异，但是总体是不影响与对照之间的表达差异的。 |
2楼2014-11-12 08:53:10
4楼2014-11-12 17:11:25
5楼2014-11-13 10:27:14
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