24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2462  |  回复: 26
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)

[求助] 反转录后PCR扩不出目的条带 已有7人参与

最近刚开始自己的实验,只有一个细胞株,想要从这个细胞株里提RNA,反转录后PCR扩出需要的目的基因序列。反转录后PCR用了GAPDH的引物做对照,GAPDH能够扩出来,但是需要的目的基因条带一直扩不出来,条带都没有。模板、引物、酶量、温度梯度都试过,一直失败中,希望大家多给指点指点,求分享经验!另外,如果我需要其他的目的基因序列,能也从这个细胞株里相同方法得到吗?谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
6楼2014-11-12 14:13:54
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 27 个回答

shoufangche

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-11 16:36:04
GAPDH能够扩出来说明你的DNA模版是没有问题的,是引物序列不合适吧
2楼2014-11-11 12:27:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-11 16:36:12
扩不出来原因有很多,需要逐步排查原因。我觉得可以考虑先找其他质量可以的cDNA看看你的引物质量如何,如果引物设计有问题怎么扩都不会有带的。其次,先弄清楚该基因在你那个细胞株里面表不表达,表达时间等等。再次,RNA提取质量要有保证,这样反转录效率才高,模板质量有保证。
3楼2014-11-11 14:49:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半岛铁盒lsf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shoufangche at 2014-11-11 12:27:23
GAPDH能够扩出来说明你的DNA模版是没有问题的,是引物序列不合适吧

因为还有定量PCR的引物,就用定量PCR的引物也在普通PCR仪上试了试,也是出不来。就在想是不是提的RNA降解了,或者细胞本身表达那个蛋白还是有点少。所以打算跑胶再看看RNA,另外重新问别人要到另一个细胞株提的RNA,想一起跑胶看看再试试能不能P出来。
4楼2014-11-11 20:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 学硕274求调剂 +13 Li李鱼 2026-03-26 13/650 2026-03-31 08:17 by jp9609
[考研] 085601 329分调剂 +4 yzsa12 2026-03-31 4/200 2026-03-31 08:11 by jp9609
[考研] 085601一志愿中山大学深圳材料工程330求调剂 +5 pipiver 2026-03-30 5/250 2026-03-31 07:37 by JourneyLucky
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +5 小张zxy张 2026-03-26 10/500 2026-03-31 00:29 by jp9609
[考研] 一志愿南开大学0710生物学359求调剂 +5 兔兔兔111223314 2026-03-29 7/350 2026-03-30 18:29 by 兔兔兔111223314
[考研] 070300化学354求调剂 +7 101次希望 2026-03-28 7/350 2026-03-30 13:22 by Iveryant
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +13 丹青奶盖 2026-03-26 15/750 2026-03-30 12:35 by fangnagu
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +25 RichLi_ 2026-03-25 25/1250 2026-03-30 11:02 by klasasda
[考研] 311求调剂 +10 lin0039 2026-03-26 10/500 2026-03-30 10:26 by herarysara
[考研] 一志愿211,335分,0856,求调剂院校和导师 +7 倾____萧 2026-03-27 8/400 2026-03-30 09:37 by longlotian
[考研] 289求调剂 +5 BrightLL 2026-03-29 5/250 2026-03-29 17:24 by zhyzzh
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-29 5/250 2026-03-29 16:46 by 学员8dgXkO
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[考研] 085600,专业课化工原理,321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 0703化学338求调剂! +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
信息提示
请填处理意见