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Devil_Jimmy

银虫 (小有名气)

[求助] 细胞突然就不长了 求细胞达人指导!!!有图 已有8人参与

我养的是髓母细胞瘤细胞株,本来一直长的很好的,长的很快的,正常分瓶培养,基本一天就满,最多两天
加药预实验都做好了,就准备正式开始处理了,但是突然细胞就停止生长了,种六孔板后加药后,第二天发现细胞几乎没长,
死细胞飘了不少,之后天天换液观察两天,细胞几乎不生长,确切的说是长的都是死的,或者也许是死的跟长的速度相当,
反正细胞数量增加相当缓慢,实验没办法继续了,
于是换了血清,配置了新的培养液,重新复苏细胞养,但是奇怪的是新复苏的细胞只有很少部分贴壁,换液培养好几天也是几乎不见生长,
继续复苏4瓶细胞,情况相同,是在头疼,找不到原因,
有一点值得提的是,自从前几天加药后,就发现死去的细胞都会被一种类似黑色液滴的东西附着,原以为是加进去的药物分子,
但是现在发现,我重新复苏的细胞没有加药,也是如此,
实验已经耽误一个星期了,细胞还是不见好转,郁闷死
今天拍了图片,请各位大哥大姐大神帮忙分析下,出点主意

细胞突然就不长了  求细胞达人指导!!!有图


细胞突然就不长了  求细胞达人指导!!!有图-1
图像1.jpg


细胞突然就不长了  求细胞达人指导!!!有图-2
图像2.jpg


细胞突然就不长了  求细胞达人指导!!!有图-3
图像3.jpg


细胞突然就不长了  求细胞达人指导!!!有图-4
图像4.jpg
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神外
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mmmhongxin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by Devil_Jimmy at 2014-11-13 15:00:10
我的细胞也终于活过来了。
今天又发现新的问题,堪称神奇的现象啊,我细胞种六孔板后长的太密集了,我准备胰酶消化后分成两份,可以种两个板,但是奇怪的是,我加入胰酶后,细胞直接裂解掉了,郁闷死了,问了实验 ...

呵呵 我也碰到过这样的 6孔板测流式的时候,找不到原因 也不是加药浓度太大使细胞损伤了。后来做实验基本都是平行2块板子  某一个孔不能用就舍弃了……不知道还有没有更好的办法……
11楼2014-11-13 19:21:12
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星火之源

木虫 (小有名气)

学者

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那你加生长素了吗?,另外,癌细胞怎么会 贴壁呢,他的黏附性不是下降了吗
谋事在人,成事在天
2楼2014-11-08 13:34:05
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Luse_91

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Devil_Jimmy: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-11-09 10:11:33
不能天天换液,细胞本身要分泌一种生长因子的,你天天换液的话,细胞会长得很慢。你这个样子可能是污染了吧,至于是什么污染我就不清楚了,你可以把你的耗材都灭菌啥的,重新养养试试。还有你培养基还和以前一样吗?同一种培养基不同厂家也会有很大影响的,我前几天就是这样的,现在一直没养细胞。同一种培养基不同厂家培养基会有很大差别的。我前几天用的是Corning的DMEM,然后直接换成Hyclone,然后细胞直接不长了,但是我以前试过直接换成Gibco的,长得也挺好的。
还有就是培养基的营养成分了,比如糖、丙酮酸钠,谷氨酰胺之类的,都是要注意的。
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
3楼2014-11-08 15:16:32
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Devil_Jimmy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-11-08 15:16:32
不能天天换液,细胞本身要分泌一种生长因子的,你天天换液的话,细胞会长得很慢。你这个样子可能是污染了吧,至于是什么污染我就不清楚了,你可以把你的耗材都灭菌啥的,重新养养试试。还有你培养基还和以前一样吗? ...

谢谢回帖
我用的是Gibco的DMEM,之前一直没问题,我实在找不到原因了,那个黑色的圈圈也不知道什么东西,我再买瓶新的培养基试试吧
神外
4楼2014-11-09 10:10:01
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