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Devil_Jimmy银虫 (小有名气)
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[求助]
细胞突然就不长了 求细胞达人指导！！！有图 已有8人参与
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我养的是髓母细胞瘤细胞株，本来一直长的很好的，长的很快的，正常分瓶培养，基本一天就满，最多两天 加药预实验都做好了，就准备正式开始处理了，但是突然细胞就停止生长了，种六孔板后加药后，第二天发现细胞几乎没长， 死细胞飘了不少，之后天天换液观察两天，细胞几乎不生长，确切的说是长的都是死的，或者也许是死的跟长的速度相当， 反正细胞数量增加相当缓慢，实验没办法继续了， 于是换了血清，配置了新的培养液，重新复苏细胞养，但是奇怪的是新复苏的细胞只有很少部分贴壁，换液培养好几天也是几乎不见生长， 继续复苏4瓶细胞，情况相同，是在头疼，找不到原因， 有一点值得提的是，自从前几天加药后，就发现死去的细胞都会被一种类似黑色液滴的东西附着，原以为是加进去的药物分子， 但是现在发现，我重新复苏的细胞没有加药，也是如此， 实验已经耽误一个星期了，细胞还是不见好转，郁闷死 今天拍了图片，请各位大哥大姐大神帮忙分析下，出点主意   图像1.jpg  图像2.jpg  图像3.jpg  图像4.jpg |
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Devil_Jimmy
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我的细胞也终于活过来了。 今天又发现新的问题，堪称神奇的现象啊，我细胞种六孔板后长的太密集了，我准备胰酶消化后分成两份，可以种两个板，但是奇怪的是，我加入胰酶后，细胞直接裂解掉了，郁闷死了，问了实验室的老师，他说从来没遇到过这样的情况，实在想不明白，网上查也没有类似的消息。 我用同样的胰酶消化6个孔，第一个空是没问题的，其他5个孔有一个孔是一部分裂解了，一部分消化后飘起来了，其他孔都直接裂解了，过来一会几乎细胞轮廓都没有了，只能看见星星点点的残留的黑点， 我怀疑是胰酶的问题，于是消化了另外的一瓶细胞，也没出现问题， 不知道前辈有没有类似的经验？希望能解释下 一瓶胰酶分装后，-20度保存，每次用的时候拿出一瓶，现在都快用完了，应该不是胰酶的问题吧 |
10楼2014-11-13 15:00:10
星火之源
木虫 (小有名气)
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2楼2014-11-08 13:34:05
Luse_91
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
Devil_Jimmy: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-11-09 10:11:33
感谢参与，应助指数 +1
Devil_Jimmy: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-11-09 10:11:33
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不能天天换液，细胞本身要分泌一种生长因子的，你天天换液的话，细胞会长得很慢。你这个样子可能是污染了吧，至于是什么污染我就不清楚了，你可以把你的耗材都灭菌啥的，重新养养试试。还有你培养基还和以前一样吗？同一种培养基不同厂家也会有很大影响的，我前几天就是这样的，现在一直没养细胞。同一种培养基不同厂家培养基会有很大差别的。我前几天用的是Corning的DMEM，然后直接换成Hyclone，然后细胞直接不长了，但是我以前试过直接换成Gibco的，长得也挺好的。 还有就是培养基的营养成分了，比如糖、丙酮酸钠，谷氨酰胺之类的，都是要注意的。 |
3楼2014-11-08 15:16:32
Devil_Jimmy
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4楼2014-11-09 10:10:01
30