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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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biofind

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR扩增效率和收集荧光信号问题 已有2人参与

大侠好。
我的荧光定量PCR扩增效率一直在80-85%,请问这样的荧光定量可否用?一般大家的扩增效率在多少是可用的?
我用三步法做荧光定量PCR,条件是95度15s,58度30S,72度20S,我想问我是在58度30S结束后收集荧光信号,还是在72度20S收集荧光信号?
我现在是在58度30S,但我不知道这样对不对?
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浅笑微微

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
biofind: 金币+3 2014-11-05 10:10:20
扩增效率在0.8~1.2理论上可用,找最接近于1的,我做的一般都是0.9几的、1.0几的。有的基因设计几对引物都不太好,就选个最优的,或者重新设计
4楼2014-11-04 15:30:51
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fallout76

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-04 12:46:19
biofind: 金币+2 2014-11-05 10:10:16
本帖内容被屏蔽

2楼2014-11-04 09:57:59
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biofind

新虫 (小有名气)

不,我用的是EvaGreen法,是一种染料法,和SYBR法十分类似
3楼2014-11-04 10:02:45
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