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biofind

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 736167
注册: 2009-03-31
专业: 生物化学

[求助] 荧光定量PCR扩增效率和收集荧光信号问题已有2人参与

大侠好。
我的荧光定量PCR扩增效率一直在80-85%，请问这样的荧光定量可否用？一般大家的扩增效率在多少是可用的？
我用三步法做荧光定量PCR，条件是95度15s，58度30S，72度20S，我想问我是在58度30S结束后收集荧光信号，还是在72度20S收集荧光信号？
我现在是在58度30S，但我不知道这样对不对？

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1楼 2014-11-03 15:42:17

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biofind

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 736167
注册: 2009-03-31
专业: 生物化学

不，我用的是EvaGreen法，是一种染料法，和SYBR法十分类似

3楼2014-11-04 10:02:45

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fallout76

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-04 12:46:19
biofind: 金币+2 2014-11-05 10:10:16

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2楼2014-11-04 09:57:59

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浅笑微微

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
biofind: 金币+3 2014-11-05 10:10:20

扩增效率在0.8~1.2理论上可用，找最接近于1的，我做的一般都是0.9几的、1.0几的。有的基因设计几对引物都不太好，就选个最优的，或者重新设计

4楼2014-11-04 15:30:51

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