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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR扩增效率和收集荧光信号问题
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biofind

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR扩增效率和收集荧光信号问题 已有2人参与

大侠好。
我的荧光定量PCR扩增效率一直在80-85%，请问这样的荧光定量可否用？一般大家的扩增效率在多少是可用的？
我用三步法做荧光定量PCR，条件是95度15s，58度30S，72度20S，我想问我是在58度30S结束后收集荧光信号，还是在72度20S收集荧光信号？
我现在是在58度30S，但我不知道这样对不对？
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1楼 2014-11-03 15:42:17
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fallout76

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-04 12:46:19
biofind: 金币+2 2014-11-05 10:10:16
本帖内容被屏蔽
2楼2014-11-04 09:57:59
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biofind

新虫 (小有名气)
不，我用的是EvaGreen法，是一种染料法，和SYBR法十分类似
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3楼2014-11-04 10:02:45
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浅笑微微

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
biofind: 金币+3 2014-11-05 10:10:20
扩增效率在0.8~1.2理论上可用，找最接近于1的，我做的一般都是0.9几的、1.0几的。有的基因设计几对引物都不太好，就选个最优的，或者重新设计
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4楼2014-11-04 15:30:51
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