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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 关于DNA浓度和DNA长度的问题
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gaowei1160

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于DNA浓度和DNA长度的问题 已有2人参与

最近提了一批样品，电泳检测总DNA时，发现很多都降解了，但是浓度都还挺高的。听师兄师姐说，浓度高有可能是DNA降解导致的，所以我就有个疑问，测DNA浓度的仪器是根据吸光度算的，不知道这个吸光度是和根据总的碱基数计算的，还是根据链的条数来算的？如果是根据DNA条数的话，那降解的DNA条数多了，浓度可能就会高了；如果是根据碱基数算的话，那降不降解应该对浓度不会产生影响。一直搞不明白，希望各位了解这方面知识的大神能够给些解释！
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我的未来我做主
1楼 2014-11-03 00:32:07
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-03 15:10:59
1、加RNase处理了么？确定不是RNA污染么？
2、实验目的是什么？不同试验要求纯度不一样的。比如PCR检测，有的直接叶片煮下就可以做模板了。
3、提取方法是什么？仔细研读提取方法和注意事项，注意提取过程中的剧烈震荡和轻轻混合的区别。。。
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2楼2014-11-03 09:03:43
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linzshit

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gaowei1160(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:08:17
紫外分光光度计的原理是不同的分子、原子会有特定波长的吸收，影响因素有浓度大小和结构不同（后者是在分子水平上），你所说的问题应该是纠结于长链变成短链算不算结构变化，会不会直接决定吸收值得问题。
实际上，DNA分子在溶液中是呈游离状态，同等浓度的长链和短链在同一波长下的吸收光是一样的，不会因为链长在溶液中可能形成特殊结构（可以想象系鞋带）而改变光吸收，而且也不会形成那种情况。
其实你也可以把它想象成按照碱基数量来决定吸光值，但实际肯定不是那样的，原因就是你去测dNTPs和DNA，同样的浓度肯定不一样多。
以上都是个人想法，希望能够帮助你
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3楼2014-11-24 15:33:08
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