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sun_in_night

木虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-30 14:40:46

引用回帖:

8楼: Originally posted by jjsh310 at 2014-10-29 14:59:22
嘿嘿我说的不引入新的核苷酸就是不想用载体链接。我的意思是用高保真酶扩4K的片段怕太长，扩出来的序列错误率高。因为我需要表达，所以不能出错。而且不能连接的时候引入其他核苷酸。高保真酶可以做到扩4K的 ...

一般的高保真酶能做到10k-15k只有一个碱基出错，这还是比较一般的那种。。。现在做克隆扩10k的根本不是问题，你说的1k-1.5k会出错那是指一般的酶，用来做鉴定的。一般实验室都会有专门用来做克隆的酶和一般PCR鉴定的,仔细看一下你们实验室用的酶的说明好了。
PS：还是不懂你说的“不用载体链接”什么意思，不放入载体你怎么表达你的基因呢？

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jjsh310

11楼2014-10-30 12:04:50

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jjsh310

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

11楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-10-30 12:04:50
一般的高保真酶能做到10k-15k只有一个碱基出错，这还是比较一般的那种。。。现在做克隆扩10k的根本不是问题，你说的1k-1.5k会出错那是指一般的酶，用来做鉴定的。一般实验室都会有专门用来做克隆的酶和一般PCR鉴定 ...

我是分子刚入门，而且我们实验室也很少做分子。我以为4k的长片段扩增不可以呢。所以我打算分段扩增，可是我扩出来的小片段还不知道怎么连接，所以我计划引入酶切位点再连起来。虽然很费劲，但这也是我这小小的脑容量里想出来的最好的办法了，但是这样就会引入新的核苷酸对我的序列有影响。所以我就郁闷了。。。。说明书上也没写可以扩多长的片段。。。既然您说高保真的可以那我就放心了。我再再网上仔细找找其他的说明书。万分感谢。