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jjsh310

金虫 (小有名气)

[求助] 如何高保真的扩增长约4K的DNA,不引入其他杂核苷酸 已有6人参与

我有段约4K的DNA序列   想扩增出来   因为要翻译成蛋白所以不能引入其它的核苷酸影响翻译   求大神赐教
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初来乍到··
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jjsh310

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-10-30 09:36:44
是4K的DNA序列还是cDNA序列啊?DNA能直接翻译蛋白质吗?用LA肯定能扩出来,但是碱基出错的可能性也很大。如果后续实验要求结果高的话,还是用高保真酶吧。

我是要扩病毒的RNA反转录出的cDNA,扩增后还需要转录出RNA,RNA转染到细胞后直接作为模板翻译。所以对模板的要求较高。高保真酶可以扩4K的序列吗   会不会出错的几率也大。   正在考虑使用In-fusion   不知道哪个更好一些    请教经常做分子的高手,我是学生,所以特别不了解。还请您赐教。
初来乍到··
7楼2014-10-30 10:55:45
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:26:50
用高保真的酶是一定的,实在不行分成两段扩看看
2楼2014-10-29 15:12:14
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jjsh310

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 15:12:14
用高保真的酶是一定的,实在不行分成两段扩看看

请问分成两段怎么连接到一起呀  我不想引入新的序列     用LA酶扩增特异性强不强呀。扩增序列会不会有错误
初来乍到··
3楼2014-10-29 15:59:01
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:26:55
用高保真酶就可以了吧···
···
4楼2014-10-29 16:00:59
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