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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何高保真的扩增长约4K的DNA，不引入其他杂核苷酸
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jjsh310

金虫 (小有名气)

[求助] 如何高保真的扩增长约4K的DNA，不引入其他杂核苷酸 已有6人参与

我有段约4K的DNA序列   想扩增出来   因为要翻译成蛋白所以不能引入其它的核苷酸影响翻译   求大神赐教
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初来乍到··
1楼 2014-10-29 14:50:57
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jjsh310

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-10-30 09:36:44
是4K的DNA序列还是cDNA序列啊?DNA能直接翻译蛋白质吗？用LA肯定能扩出来，但是碱基出错的可能性也很大。如果后续实验要求结果高的话，还是用高保真酶吧。

我是要扩病毒的RNA反转录出的cDNA，扩增后还需要转录出RNA，RNA转染到细胞后直接作为模板翻译。所以对模板的要求较高。高保真酶可以扩4K的序列吗   会不会出错的几率也大。   正在考虑使用In-fusion   不知道哪个更好一些    请教经常做分子的高手，我是学生，所以特别不了解。还请您赐教。
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初来乍到··
7楼2014-10-30 10:55:45
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:26:50
用高保真的酶是一定的，实在不行分成两段扩看看
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2楼2014-10-29 15:12:14
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jjsh310

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 15:12:14
用高保真的酶是一定的，实在不行分成两段扩看看

请问分成两段怎么连接到一起呀  我不想引入新的序列     用LA酶扩增特异性强不强呀。扩增序列会不会有错误
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初来乍到··
3楼2014-10-29 15:59:01
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:26:55
用高保真酶就可以了吧···
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···
4楼2014-10-29 16:00:59
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