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8mile

木虫 (正式写手)

谢谢各位,今天刚用52度看看
11楼2008-05-07 01:34:27
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taishuai2004

很简单啊
做个大尺度梯度PCR  再做个小尺度梯度PCR
一天就可以把最好的退火温度摸出来
不要这里瞎猜
12楼2008-05-12 16:06:20
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amilie030312

金虫 (正式写手)

如果不用梯度做的话我建议你用50-52度做一下,给你个小东西,我当时做的时候是很好用,你用它来摸索一个你的PCR仪和这个的相对温度,以后就都用这个来计算就好了,很方便,不用每次都摸温度了。
http://sky.scnu.edu.cn/life/teac ... que/pcr_counter.htm
13楼2008-05-14 16:37:33
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playboy723

金虫 (正式写手)

50----55范围内试试  或者直接touch downPCR就行
14楼2008-05-14 17:28:44
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liulangnmg

铁虫 (小有名气)

前段时间刚设计的引物,用不同的软件计算的Tm值是不同的。我用了Oligo计算的Tm-12作为退火温度,第一次就做出来了,而且条带比较亮,二聚体也很少。如果用PP5的话,在原有的基础上减少7度左右。
15楼2008-05-17 23:54:02
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