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goldchengli金虫 (小有名气)
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[求助]
求芽孢孢子的破壁方法 已有2人参与
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| 请问哪位虫子曾做过芽孢孢子破壁的实验，想提取里面的DNA，请各位虫子出谋献策。在此感谢！ |
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20093651
铁杆木虫 (职业作家)
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【答案】应助回帖
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goldchengli: 金币+50 2014-10-30 13:56:03
goldchengli: 金币+50 2014-10-30 13:56:03
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4.1.1.1 酶法小量DNA提取 1．50mg菌体加1×TE稀释成2mg/ml 的溶菌酶500μL放入37℃摇床1—2小时； 2．加20%SDS 50μL 及蛋白酶pK 5μL震荡混匀1分钟, 放入55℃烘箱30-60分钟〔pK浓度为20ug/mL〕； 3．加550 μL 苯酚:氯仿:异戊醇（25：24：1）, 震荡混匀，12000rpm离心10分钟, 吸取上清液(不要吸到中间渣滓，重复抽提2次)； 4．上清液加入50 μL 3mol/L乙酸钠(PH 4.8-5.2)混匀后加500 μL异丙醇，放入-20℃冰箱1-2小时或过夜；或者加800ul无水乙醇，加80μL 3mol/L乙酸钠(PH 4.8-5.2)室温放置10分钟以上； 5．12000 rpm 离心10分钟，去除上清液,加200μL 70% 乙醇，轻摇洗盐1—2次，12000 rpm低温离心 5分钟，弃乙醇； 6．(37-55)℃干燥后加1×TE 50μL溶解DNA(视DNA量而定), -20℃保存备用。 这是我们实验室自编手册的方法，也是最常用的，祝好  |
6楼2014-10-24 08:14:23
樊夫子
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2楼2014-10-23 19:52:54
20093651
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3楼2014-10-23 20:35:20
goldchengli
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4楼2014-10-24 07:56:26