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艾米的小屋

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR 已有6人参与

你好,我最近做基因克隆,将PCR胶回收产物与pMD19-T酶连后,导入DH5a中,蓝白斑筛后,挑单菌落做菌液PCR,做了两次也做不出来,怎么回事呢?
菌液PCR体系:10ul
mix      5ul
引物1  0.5ul
引物2  0.5ul
菌液    1ul
水       3ul
注:我已经不是第一次做基因克隆了,但是从来没有出现过这个问题,实在想不明白,求高人支招,谢谢!
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:02:05
将单菌落用0.25% 的SDS处理,热击和冰浴五分钟,三个循环,得到粗提的基因组,作为模板可以试试
9楼2014-10-23 16:42:11
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
菌浓度怎样?用1ul是否可行呢?
发展才是硬道理!
2楼2014-10-23 11:50:52
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-23 12:32:26
我们这里都是用牙签调菌直接接到PCR体系中,如果正确的话肯定可以P得出来的···我最近也在连19T载体,也遇到相同的情况,用PCR扩增的时候没有条带,但酶切可以切出来,也搞不清楚是怎么回事···
···
3楼2014-10-23 11:57:57
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jian212

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:02:24
考虑下提取下质粒看看能不能P的出来,易或者你长的菌就不是阳性克隆。。
学习再学习,努力再努力。
4楼2014-10-23 13:54:18
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