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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化后蛋白中DNA污染检测
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honeywanghe

铁虫 (初入文坛)

[求助] 纯化后蛋白中DNA污染检测已有3人参与

求教下有什么方法可以检测纯化后的蛋白中是否含有DNA污染、污染程度如何呀？
求大神指点！谢谢啦！
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1楼2014-10-15 17:15:55
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-17 15:52:56
纯化的时候加过量的DNA酶和氯化镁，充分降解DNA，经过几步纯化后就不会有DNA了。
痕量、超痕量检测很难，也没有必要。前期工作做充分了，后来就不用担心了。
希望对你有帮助！
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7楼2014-10-17 08:19:15
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人意见，选一个宿主菌或细胞的保守基因，然后上荧光定量，如果低于某个数值，就可以认为没有了吧？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-10-15 17:24:11
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毛毛虫123321

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
honeywanghe(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-16 14:57:39
紫外分光光度计测A260 和A280  一般 A280/A260在1.5-2.0之间 蛋白纯度较高 基本无核酸
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3楼2014-10-16 10:55:42
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honeywanghe

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-10-15 17:24:11
个人意见，选一个宿主菌或细胞的保守基因，然后上荧光定量，如果低于某个数值，就可以认为没有了吧？

谢谢  我做的是蛋白酶  需要检验纯化后的蛋白酶是否有DNA污染  因为纯化过程中已经尽量减少DNA的存在了  现在的目的就是要在不影响酶活的前提下验证是否成功  是否DNA污染足够小以致可以忽略其对酶活性的影响。 不知可有什么好的建议  期待您的解答！
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4楼2014-10-16 13:54:56
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