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honeywanghe

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 纯化后蛋白中DNA污染检测已有3人参与

求教下有什么方法可以检测纯化后的蛋白中是否含有DNA污染、污染程度如何呀？
求大神指点！谢谢啦！

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1楼2014-10-15 17:15:55

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pennchem

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
honeywanghe: 金币+4, ★有帮助 2014-10-17 12:55:54

引用回帖:

4楼: Originally posted by honeywanghe at 2014-10-16 13:54:56
谢谢我做的是蛋白酶需要检验纯化后的蛋白酶是否有DNA污染因为纯化过程中已经尽量减少DNA的存在了现在的目的就是要在不影响酶活的前提下验证是否成功是否DNA污染足够小以致可以忽略其对酶活性的影响。不 ...

我这里假设你用大肠杆菌作为宿主菌表达你的目的蛋白，那么纯化中最大的污染源就是大肠杆菌的基因组DNA和质粒DNA
所以选一个大肠杆菌的保守基因，做一个荧光定量，可以定量得出你的蛋白核酸含量。
然后这个浓度足够低的情况下，应该可以排除核酸对你的蛋白活性的影响。