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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化后蛋白中DNA污染检测
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honeywanghe

铁虫 (初入文坛)

[求助] 纯化后蛋白中DNA污染检测 已有3人参与

求教下有什么方法可以检测纯化后的蛋白中是否含有DNA污染、污染程度如何呀？
求大神指点！谢谢啦！
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1楼 2014-10-15 17:15:55
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人意见，选一个宿主菌或细胞的保守基因，然后上荧光定量，如果低于某个数值，就可以认为没有了吧？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-10-15 17:24:11
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
honeywanghe: 金币+4, ★有帮助 2014-10-17 12:55:54
引用回帖:
4楼: Originally posted by honeywanghe at 2014-10-16 13:54:56
谢谢  我做的是蛋白酶  需要检验纯化后的蛋白酶是否有DNA污染  因为纯化过程中已经尽量减少DNA的存在了  现在的目的就是要在不影响酶活的前提下验证是否成功  是否DNA污染足够小以致可以忽略其对酶活性的影响。 不 ...

我这里假设你用大肠杆菌作为宿主菌表达你的目的蛋白，那么纯化中最大的污染源就是大肠杆菌的基因组DNA和质粒DNA
所以选一个大肠杆菌的保守基因，做一个荧光定量，可以定量得出你的蛋白核酸含量。
然后这个浓度足够低的情况下，应该可以排除核酸对你的蛋白活性的影响。
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行至水穷处，坐看云起时
6楼2014-10-16 22:58:22
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by honeywanghe at 2014-10-17 12:55:47
谢谢   受用了   不过这个浓度足够低有木有相关文献显示低到什么程度可以排除核酸对蛋白活性的影响呀？...

这个，我的理解是，如果有标准，就按标准来，如果没有，你自己就做一个标准出来。
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行至水穷处，坐看云起时
10楼2014-10-18 14:17:27
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