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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 用pet28a当表达载体设计引物遇到问题了
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525310523

木虫 (初入文坛)

[求助] 用pet28a当表达载体设计引物遇到问题了 已有4人参与

请教各位大神，我用pet28a当表达载体设计引物，用的是EcoR I和Sal I这两个酶切位点，下游引物我加了终止密码子，所以，后面的his标签是不表达的。现在比较纠结的是发现，Nde l 酶切位点和BamH I酶切位点之间都有ATG密码子，我担心它们中间表达的蛋白会不会跟我的目的蛋白结合在一起，会不会影响目的蛋白的结构？还有，前面的HIS标签应该能跟我的目的蛋白结合的吧？

用pet28a当表达载体设计引物遇到问题了
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1楼 2014-10-15 10:38:41
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-16 11:23:13
本帖内容被屏蔽
3楼2014-10-15 21:18:18
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圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-16 11:23:08
525310523: 金币+1, ★有帮助 2014-10-20 17:11:24
放心，别人设计的这个载体会读码乱码的，要不然设计出来有这个问题，那么这个载体就没有存在的意义啦，这点不用担心。
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2楼2014-10-15 14:50:23
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dongmings

木虫之王 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-16 15:47:53
525310523: 金币+3, ★有帮助 2014-10-20 17:11:47
和Nde l 酶切位点和BamH I酶切位点之间的ATG没有关系，从Nco1下面的那个ATG开始，一直到RcoR1之间的氨基酸都会连接在你目的蛋白的N端。一般不会影响你的结构，因为一般情况，N端不在蛋白质内部。
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4楼2014-10-16 13:30:22
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
525310523: 金币+1, ★有帮助 2014-10-20 17:12:08
核糖体结合到rbs上然后往下走，碰到第一个ATG开始翻译，直到碰见终止密码子翻译结束。
你所担心的问题不存在。
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5楼2014-10-17 08:32:46
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