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hymark2003

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by HX91926 at 2014-10-17 09:21:02
从表达开始,IPTG从0.1到1,温度从20到37,时间4h到10h,加诱导剂的OD从0.4到1.0,还有加乳糖,低温下过夜等等都试过了。
前期的话,转化成功之后送去测序是没问题的,不过暑假回家了,保过钟到-80保存,回来pcr大 ...

1. 换细胞表达
2. 换表达体系,昆虫细胞,酵母细胞。。。
3. 截短表达,如果是做抗体,是可以的
4. 直接找公司合成这个蛋白
学习,共同学习
11楼2014-10-17 09:55:56
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wanglele87

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
很多蛋白没有可溶性表达,很正常。可以试试用包涵体跑胶看看。当然你需要先测序验证你克隆没问题。
一生不羁放纵爱自由
12楼2014-10-17 11:45:47
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siriusxuan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by HX91926 at 2014-10-17 09:21:02
从表达开始,IPTG从0.1到1,温度从20到37,时间4h到10h,加诱导剂的OD从0.4到1.0,还有加乳糖,低温下过夜等等都试过了。
前期的话,转化成功之后送去测序是没问题的,不过暑假回家了,保过钟到-80保存,回来pcr大 ...

转化的时候质粒浓度一般是300ng/ml,先转进Top10,再提质粒,如果一个实验室都做不出来,也许是菌有点问题吧。。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
13楼2014-10-19 00:25:59
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wfp008

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不懂,但是给楼主赞一个!

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2014-10-19 09:59:18
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