麻烦问一下实验室做表达经常不成功是怎么回事 - 分子生物 - 分子生理 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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hymark2003

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10楼: Originally posted by HX91926 at 2014-10-17 09:21:02
从表达开始，IPTG从0.1到1，温度从20到37，时间4h到10h，加诱导剂的OD从0.4到1.0，还有加乳糖，低温下过夜等等都试过了。
前期的话，转化成功之后送去测序是没问题的，不过暑假回家了，保过钟到-80保存，回来pcr大 ...

1. 换细胞表达
2. 换表达体系，昆虫细胞，酵母细胞。。。
3. 截短表达，如果是做抗体，是可以的
4. 直接找公司合成这个蛋白

学习,共同学习

11楼2014-10-17 09:55:56

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wanglele87

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很多蛋白没有可溶性表达，很正常。可以试试用包涵体跑胶看看。当然你需要先测序验证你克隆没问题。

一生不羁放纵爱自由

12楼2014-10-17 11:45:47

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siriusxuan

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引用回帖:

10楼: Originally posted by HX91926 at 2014-10-17 09:21:02
从表达开始，IPTG从0.1到1，温度从20到37，时间4h到10h，加诱导剂的OD从0.4到1.0，还有加乳糖，低温下过夜等等都试过了。
前期的话，转化成功之后送去测序是没问题的，不过暑假回家了，保过钟到-80保存，回来pcr大 ...

转化的时候质粒浓度一般是300ng/ml，先转进Top10，再提质粒，如果一个实验室都做不出来，也许是菌有点问题吧。。

此座可言轻社稷，江山万里起风尘。

13楼2014-10-19 00:25:59

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wfp008

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不懂，但是给楼主赞一个！

[ 发自小木虫客户端 ]

14楼2014-10-19 09:59:18

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