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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 麻烦问一下实验室做表达经常不成功是怎么回事
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hymark2003

木虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by HX91926 at 2014-10-17 09:21:02
从表达开始，IPTG从0.1到1，温度从20到37，时间4h到10h，加诱导剂的OD从0.4到1.0，还有加乳糖，低温下过夜等等都试过了。
前期的话，转化成功之后送去测序是没问题的，不过暑假回家了，保过钟到-80保存，回来pcr大 ...

1. 换细胞表达
2. 换表达体系，昆虫细胞，酵母细胞。。。
3. 截短表达，如果是做抗体，是可以的
4. 直接找公司合成这个蛋白
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学习,共同学习
11楼2014-10-17 09:55:56
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wanglele87

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
很多蛋白没有可溶性表达，很正常。可以试试用包涵体跑胶看看。当然你需要先测序验证你克隆没问题。
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一生不羁放纵爱自由
12楼2014-10-17 11:45:47
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by HX91926 at 2014-10-17 09:21:02
从表达开始，IPTG从0.1到1，温度从20到37，时间4h到10h，加诱导剂的OD从0.4到1.0，还有加乳糖，低温下过夜等等都试过了。
前期的话，转化成功之后送去测序是没问题的，不过暑假回家了，保过钟到-80保存，回来pcr大 ...

转化的时候质粒浓度一般是300ng/ml，先转进Top10，再提质粒，如果一个实验室都做不出来，也许是菌有点问题吧。。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
13楼2014-10-19 00:25:59
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wfp008

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不懂，但是给楼主赞一个！

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14楼2014-10-19 09:59:18
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