24小时热门版块排行榜    

查看: 3239  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 为啥RT-PCR的空白对照也出现了目的条带? 已有2人参与

做RT-PCR时,为了保证不是RNA的质量问题引起的失败,在反转录时就做了空白对照,在一组PCR管中加的是无菌水代替RNA,其余条件均不变,最后用两组实验合成的cDNA做模板,进行PCR反应,反应体系及程序完全一样,最后扩增的结果如图一。左一和左三是加了RNA的,左二和左四是加无菌水代替RNA的,右一是marker,奇怪的是我的目的条带大概就在1000,这个结果差不多正确,1500bp的marker,但为啥加了无菌水代替RNA的也能出目的条带?
    而且,楼主当时举得marker有些没有跑开,把胶又拿回去跑,最后再进行检测,就出现了图二,左二和左四降解比较明显。
    对于这种结果,我真是醉了,现在完全不知道问题出在哪里,请求各位大神支招,谢谢!

为啥RT-PCR的空白对照也出现了目的条带?
2014.10.13PCR结果.jpg


为啥RT-PCR的空白对照也出现了目的条带?-1
2014.10.13PCR延长电泳时间后的结果.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

喜欢生物,所以想好好研究下去!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
6楼: Originally posted by cnzpli at 2014-10-13 23:45:46
想知道到底是什么的话就分别切下来连接到通用载体上测序 结果都是你的目的片段的话就肯定是污染了
...

好吧,只能这样了,虽然过程有点漫长
喜欢生物,所以想好好研究下去!
7楼2014-10-14 11:09:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cnzpli

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-10-13 22:09:52
气溶胶污染。一些较常用的载体很容易产生气溶胶污染。我们实验室跑某些基因只要加了酶和引物就可以扩出来阳性条带。建议跑PCR之前对超净台和水彻底照紫外
2楼2014-10-13 17:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
2楼: Originally posted by cnzpli at 2014-10-13 17:08:27
气溶胶污染。一些较常用的载体很容易产生气溶胶污染。我们实验室跑某些基因只要加了酶和引物就可以扩出来阳性条带。建议跑PCR之前对超净台和水彻底照紫外

能说跑胶都是在无菌台下开着紫外灯,把线弄出来跑的吗?就是怕污染,所以每个步骤很超级严格的。那这样出来的阳性条带可靠吗?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
3楼2014-10-13 18:03:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnzpli

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-10-13 18:03:12
能说跑胶都是在无菌台下开着紫外灯,把线弄出来跑的吗?就是怕污染,所以每个步骤很超级严格的。那这样出来的阳性条带可靠吗?...

有可能反转录时空白被污染了
你跑胶上样量有点大哦 可能会飘到旁边孔的 pcr加3到5微就够了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-10-13 18:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见