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jiaoxiayoulu新虫 (小有名气)
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载体构建后诱导不表达 已有2人参与
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各位虫友，我有个问题一直困扰我：我在将目的基因插入表达载体中时，我的目的基因扩增引物是这样的：上游引物GGGGTACC -gcATGTCTAACCAAATATACTCAGCG 下游引物：ACATGCATGC -TCCGATAATGTTCCAAAGGAAGC 这个构建的载体是做基因敲除后回补用的，我想问的是上游引物中在酶切位点和起始密码子之间多了两个碱基gc对表达有影响吗？我用的载体是Pyes2，启动子是半乳糖诱导表达的gal1！但是诱导后SDS-PAGE后含有表达载体的酵母和含有空载体的酵母对照后条带都一样！这样是否能说明我的表达载体没有表达呢？做了快一个月了还没做出来，快毕业了！求指教啊 |
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