应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 体外转录RNA，为什么会出现2条带
52/1返回列表
查看: 13515  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)

[求助] 体外转录RNA，为什么会出现2条带 已有1人参与

最近做了体外转录RNA实验，质粒用的PGEM-4Z，先用Nde Ⅰ单酶切1h线性化，然后转录RNA 2h，然后加DNase Ⅰ 37℃ 1h去除模板，
然后跑琼脂糖胶鉴定，结果出现2条带

单酶切体系：NdeⅠ1μL buffer G 1μL 质粒6μL DEPC水2μL ；10μL
转录体系：5*T7buffer 10μL，单切后质粒10μL，T7酶2μL，RRI 2μL，NTP 4μL,DEPC水 22μL；50μL

体外转录RNA，为什么会出现2条带
Administrator 2014-10-09 10hr 04min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-10-10 08:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by tuo040201 at 2014-11-03 23:31:39
怎么纯化？线性化模板纯化还是探针纯化？我模板也纯化过了，但是还是两个条带...

模板单酶切，纯化以后转录，加DNase l然后纯化，纯化以后我跑胶看了下只有一条带了。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
14楼2014-11-04 12:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-11 15:44:57
你这个是什么agarose gel？
RNA变性没有？RNA的高级结构可能产生多条条带。
建议走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛变性agarose gel
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-10 19:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-10 19:28:21
你这个是什么agarose gel？
RNA变性没有？RNA的高级结构可能产生多条条带。
建议走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛变性agarose gel

我用的是一般的琼脂糖胶，RNA变性一般是70摄氏度5min，然后跑胶，因为之前转录过一次，只有一条带，这次是过了一个月又转的，失败了。你说的Urea-PAGE没做过，甲醛变性胶我可以尝试下，只是marker我用DNA的么？我这没有RNA的marker。另外想问下，RNA要多大用Urea-PAGE，多大用甲醛变性胶，我的RNA转录的大小也就500多bp
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-11 10:32:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-10 19:28:21
你这个是什么agarose gel？
RNA变性没有？RNA的高级结构可能产生多条条带。
建议走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛变性agarose gel

我用变形胶已经跑完了，但是还是有2条带。哎，不知道转录哪里出了问题了
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-11 15:41:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +11 xqy2009 2026-10-13 14/700 2026-10-16 10:28 by goodluck7111
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+4 纳斯达克ML 2026-10-11 5/250 2026-10-16 10:03 by shjy2599
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+8 David1982 2026-10-13 12/600 2026-10-16 09:50 by shjy2599
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭