应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 体外转录RNA，为什么会出现2条带
汕头大学海洋科学接受调剂
191/2返回列表12下一页
查看: 13057  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gu666hong

银虫 (小有名气)

[求助] 体外转录RNA，为什么会出现2条带 已有1人参与

最近做了体外转录RNA实验，质粒用的PGEM-4Z，先用Nde Ⅰ单酶切1h线性化，然后转录RNA 2h，然后加DNase Ⅰ 37℃ 1h去除模板，
然后跑琼脂糖胶鉴定，结果出现2条带

单酶切体系：NdeⅠ1μL buffer G 1μL 质粒6μL DEPC水2μL ；10μL
转录体系：5*T7buffer 10μL，单切后质粒10μL，T7酶2μL，RRI 2μL，NTP 4μL,DEPC水 22μL；50μL

体外转录RNA，为什么会出现2条带
Administrator 2014-10-09 10hr 04min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-10 08:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-11 15:44:57
你这个是什么agarose gel？
RNA变性没有？RNA的高级结构可能产生多条条带。
建议走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛变性agarose gel
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-10 19:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-10 19:28:21
你这个是什么agarose gel？
RNA变性没有？RNA的高级结构可能产生多条条带。
建议走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛变性agarose gel

我用的是一般的琼脂糖胶，RNA变性一般是70摄氏度5min，然后跑胶，因为之前转录过一次，只有一条带，这次是过了一个月又转的，失败了。你说的Urea-PAGE没做过，甲醛变性胶我可以尝试下，只是marker我用DNA的么？我这没有RNA的marker。另外想问下，RNA要多大用Urea-PAGE，多大用甲醛变性胶，我的RNA转录的大小也就500多bp
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-11 10:32:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-10 19:28:21
你这个是什么agarose gel？
RNA变性没有？RNA的高级结构可能产生多条条带。
建议走Urea-PAGE再看，如果RNA太大，甲醛变性agarose gel

我用变形胶已经跑完了，但是还是有2条带。哎，不知道转录哪里出了问题了
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-11 15:41:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by gu666hong at 2014-10-11 15:41:47
我用变形胶已经跑完了，但是还是有2条带。哎，不知道转录哪里出了问题了...

甲醛变性的？loading也是用的甲醛变性的loading？还是之前转录过只有一条带的？模板换过没？
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-11 18:30:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-11 18:30:04
甲醛变性的？loading也是用的甲醛变性的loading？还是之前转录过只有一条带的？模板换过没？...

对，是甲醛变性的，我是按照宝生物的一个方法做的甲醛变性电泳，具体配的体系是20微升：样品5微升，甲醛3.5微升，甲酰胺4微升，5*MOPS 4微升，6*loading 3.0微升 DEPC水0.5微升。之前转录过是一条带，模板换过，因为之前8月份提的质粒用完了，我又拿出保的菌复苏，提的质粒。
赞一下 回复此楼
6楼2014-10-11 20:03:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-12 22:55:57
引用回帖:
6楼: Originally posted by gu666hong at 2014-10-11 20:03:21
对，是甲醛变性的，我是按照宝生物的一个方法做的甲醛变性电泳，具体配的体系是20微升：样品5微升，甲醛3.5微升，甲酰胺4微升，5*MOPS 4微升，6*loading 3.0微升 DEPC水0.5微升。之前转录过是一条带，模板换过，因 ...

这怪事了！500 nt Urea-PAGE有点不合适，6%可能都高，你们若不做这个，也麻烦。
那怎办？质粒测序？
看样子你这个差的还挺远的，
你这样，把你的质粒，在T7前面不太远的地方，再找个酶切一刀，看看掉下来的片段有几条
要是还只有一条，那算是出鬼了。。。
看看你变性胶的结果
赞一下 回复此楼
7楼2014-10-11 22:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
我是打算质粒重新测序的，可是还是要做验证啊。我打算质粒先单切2个不同位点，这2个再做一次相同限制酶单切，跑胶看看2个切开后大小，再说，不知道行不？你说的想法和我差不多，明天先做做看吧

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-10-11 22:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gu666hong at 2014-10-11 22:45:16
我是打算质粒重新测序的，可是还是要做验证啊。我打算质粒先单切2个不同位点，这2个再做一次相同限制酶单切，跑胶看看2个切开后大小，再说，不知道行不？你说的想法和我差不多，明天先做做看吧
...

变性胶结果明天我再发，今天刚回来，不在电脑旁边

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2014-10-11 22:47:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-11 22:34:14
这怪事了！500 nt Urea-PAGE有点不合适，6%可能都高，你们若不做这个，也麻烦。
那怎办？质粒测序？
看样子你这个差的还挺远的，
你这样，把你的质粒，在T7前面不太远的地方，再找个酶切一刀，看看掉下来的片段 ...

这两天有事外出一直不在实验室，上传的变形胶图片，泳道3、4、5是转的RNA,6是DNAmarker2000,1是DNAmarker2000,2跑的一个RNA marker1000（借的别人的），效果很不好。另外的我的质粒已经送去测序了，等结果中，
体外转录RNA，为什么会出现2条带-1
Administrator 2014-10-11 18hr 43min.jpg
赞一下 回复此楼
10楼2014-10-15 21:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gu666hong 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 药学求调剂 +11 喽哈加油 2026-04-14 13/650 2026-04-14 21:14 by qingfeng258
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +26 慕绝cc 2026-04-09 30/1500 2026-04-14 18:50 by 蔡苏阳
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 本科211，报考085601-310分 +16 ararak 2026-04-13 16/800 2026-04-14 14:55 by Delta2012
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[基金申请] 有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子 +11 babu2015 2026-04-08 11/550 2026-04-13 16:33 by probebill
[考研] 22408 352分求调剂 +5 努力的夏末 2026-04-09 5/250 2026-04-12 19:17 by wj165256
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 计算机类求调剂，22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 生物学学硕，初试351分，求调剂 +4 …～、王…～ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭