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陈日飞

新虫 (初入文坛)

[求助] 高CG重复和连续序列怎么P出来 已有3人参与

1. 以下是我打算P的序列,引物设计决不是问题,但就是P不出来,一次P出来了大小还不对,求帮助
ttaaccctagaaagataatcatattgtgacgtacgttaaagataatcatgcgtaaaattgacgcatgtgttttatcggtctgtatatcgaggtttatttattaatttgaatagatattaagttttattatatttacacttacatactaataataaattcaacaaacaatttatttatgtttatttatttattaaaaaaaaacaaaaactcaaaatttcttctataaagtaacaaa
2. 下面这一段也是要P的,目的应该有800bp左右,但就是总P出300bp左右的条带。检查引物特异性,也没得说,好的很
cgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattgtgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtcgaggtgagccccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcggggggggggggggggcgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagtcgctgcgacgctgccttcgccccgtgccccgctccgccgccgcctcgcgccgcccgccccggctctgactgaccgcgttactcccacaggtgagcgggcgggacggcccttctcctccgggctgtaattagctgagcaagaggtaagggtttaagggatggttggttggtggggtattaatgtttaattacctggagcacctgcctgaaatcactttttttcaggttgg。非常高的连续G或C。
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daydayblue

新虫 (初入文坛)

DMSO很好用,我们实验室以前都是用DMSO pcr出GC含量高的序列的
11楼2014-10-10 16:15:51
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-06 12:34:10
那个也太高了吧  TAKARA LA taq啦 康为的 全式金的一般都有一些酶是针对高GC含量的Buffer,,我用过的La taq 就有高GC含量 buffer。你看看 ,好像全式金的HIFI 也有。。。。。。。
借口很贱,,,
2楼2014-10-05 22:39:34
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陈日飞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jonew at 2014-10-05 22:39:34
那个也太高了吧  TAKARA LA taq啦 康为的 全式金的一般都有一些酶是针对高GC含量的Buffer,,我用过的La taq 就有高GC含量 buffer。你看看 ,好像全式金的HIFI 也有。。。。。。。

都换三种酶了,还是没P出来
4楼2014-10-07 00:53:52
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jonew

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 陈日飞 at 2014-10-07 00:53:52
都换三种酶了,还是没P出来...

用高GC buffer 另外以前有人加DMSO
借口很贱,,,
5楼2014-10-07 11:17:09
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