| 查看: 3306 | 回复: 0 | |||
[求助]
qPCR引物设计问题
|
qPCR采用的是SYBR Green法。图为准备做qPCR的几个基因，在正式做前先做了常规PCR检测，结果如下，共5个基因，每个分别做了cDNA plus 和cDNA minus 及water三个孔。请问，（1）孔4,5,6,7,8,10,11,12,13,14,15出现的分别是primer dimer么？（2）除孔13未扩增出目的基因外，孔1,4,7,10均是目的基因，片段大小大概大约70-90bp之间，但孔1,4,7均出现了除引物二聚体外的其他片段大小的杂带；（3）water孔比如孔6,12,15，既然无任何样品在内，为何仍出现primer dime？说明一下，我做的马铃薯，下载下来transcripts 序列后，采用primer 3在线设计的引物，再用netprimer 对所得序列进行参数评价，选择的评分最高的，但仍不可避免带有self dimer和cross dimer，我挑选了Cytochrome_B561做了qPCR，扩增曲线和溶解曲线分别如图2和图3，是不是我所有的引物都要重新设计。本人第一次接触qPCR，真的不知道怎么办，谢谢各位解答。 2014.10.02 pm_副本_副本.jpg  Amplification Plot_YWI152_Cytochrome.jpg  Melt Curve_YWI152_Cytochrome.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
求助检测基因沉默的qPCR引物设计问题
已经有7人回复
- 求教DNA上下游引物设计的疑问
已经有13人回复
- 关于荧光定量PCR引物设计的问题
已经有7人回复
- PCR引物设计问题，求教大神~
已经有11人回复
- 请问设计引物前为什么要进行同源性比较？？
已经有15人回复
- 引物设计——下游引物是否需要考虑阅读框问题
已经有6人回复
- 人类基因组DNA引物设计问题
已经有7人回复
- real-time引物设计问题，关于保守取，内含子
已经有10人回复
- QPCR之引物设计(二)
已经有10人回复
- 荧光定量PCR设计了三对引物了，都扩增不出来，郁闷啊
已经有4人回复
- 荧光定量引物设计
已经有4人回复
- 引物设计跨内含子，操作中如何快速实现？
已经有9人回复
- 关于pcr引物设计的问题
已经有6人回复
- 设计引物注意事项？
已经有6人回复
- 大家做RT-qPCR设计引物用的什么软件呀？
已经有15人回复
- 关于qPCR的几个问题，求解答
已经有3人回复
- tail PCR中随机简并引物设计问题
已经有6人回复
- 一个关于qPCR标准曲线的问题。谢谢！
已经有12人回复
- PCR-DGGE的引物设计
已经有5人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？
已经有8人回复
- 【求助/交流】引物设计信息如此，touchdownPCR如何设计？
已经有7人回复
- 【求助/交流】qrt-pcr引物是否要纯化
已经有4人回复
- 【求助/交流】pCR引物设计的详细规则
已经有7人回复
- 引物设计求助~
已经有13人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人