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xulinan木虫 (小有名气)
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质粒图谱与阅读框问题 已有1人参与
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有两个问题请教下。 1. 我们克隆基因到一个质粒上的时候，通常引物设计是酶切位点+His tag（如果纯化）+目的基因， 但是现在的问题是老师给了一个很奇怪的序列，His tag和目的基因都有，但是Histag前还多出来一些序列，并且这些碱基不是3的整数倍，他让我用不同的酶切位点克隆到另一个质粒上，我就想如果直接按他的要求直接克隆这个序列是不是翻译的时候就框移了，因为明显的His tag前面多的几个碱基不是3的倍数啊，困惑中，又不好意思直接去找老师说他给的序列不对。请问这种情况是否会发生翻译时候框移？谢谢 2. 据说如果用p413这种质粒是不存在翻译时框移现象的，请问这是为什么？p413图谱见下，而且看起来这个图谱中promoter是在XbaI一侧啊，但是如果用XbaI/EcoRI这对酶切的话，会把EcoRI设计到Forword primer中，这个我又迷惑了，方向虽然看着两头都行，但是terminator明显在EcoRI这侧啊？EcoRI设计到Forword primer中克隆进去的基因不就放了吗？一直对基因复制的各种方向搞不清楚，请大家点播一二，谢谢。  413.jpg |
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kehan777
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