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small521

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒转入大肠杆菌中,消失 已有6人参与

完整的质粒转入大肠杆菌JM109感受态,然后提质粒,结果无质粒,但是该菌能在含有质粒抗性的平板和液体培养基中生长,有人知道是怎么回事吗?
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采英姿

银虫 (初入文坛)

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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-09-27 10:49:32
gyesang: 回帖置顶 2014-09-27 10:49:34
一是可能你在平板中长的时间太长,长出来的估计就是杂菌了;然后就是考虑抗生素的问题;还有就是你在提取的时候,我不知道你用的是哪一种提取试剂,一般的都是要DNA wash buffer和HBC buffer中加入乙醇或异丙醇,没加的话质粒的溶解度增加,估计就直接洗掉了(我们实验室有人犯过这样的错误)。
个人意见仅供参考!
雨后的青山像泪洗过的良心!爱我所爱,恨我所恨!
7楼2014-09-27 08:44:20
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陌路行客

金虫 (小有名气)

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-25 21:35:19
可能平板中抗生素失效,另外,有的杂菌可以在含有抗生素平板上生长的,还有挑单克隆的时候多挑几个,然后扩增后可以先做个菌液PCR。
人生中的悲剧太多了
2楼2014-09-25 21:30:58
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yunshenglmm

铜虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-09-27 10:49:05
划线后做菌落PCR,另外摇菌时一定要加抗生素
3楼2014-09-25 22:27:05
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焃__麟

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-27 10:49:16
两种可能:1 抗生素失效,可以做个对照看看,然后做菌液PCR;2 质粒提取方法或试剂有问题
行到水穷处,坐看云起时
4楼2014-09-25 22:44:50
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