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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒转入大肠杆菌中，消失
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small521

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒转入大肠杆菌中，消失 已有6人参与

完整的质粒转入大肠杆菌JM109感受态，然后提质粒，结果无质粒，但是该菌能在含有质粒抗性的平板和液体培养基中生长，有人知道是怎么回事吗？
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1楼 2014-09-25 18:32:17
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陌路行客

金虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-25 21:35:19
可能平板中抗生素失效，另外，有的杂菌可以在含有抗生素平板上生长的，还有挑单克隆的时候多挑几个，然后扩增后可以先做个菌液PCR。
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人生中的悲剧太多了
2楼2014-09-25 21:30:58
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yunshenglmm

铜虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-09-27 10:49:05
划线后做菌落PCR，另外摇菌时一定要加抗生素
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3楼2014-09-25 22:27:05
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焃__麟

铜虫 (初入文坛)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-27 10:49:16
两种可能：1 抗生素失效，可以做个对照看看，然后做菌液PCR；2 质粒提取方法或试剂有问题
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行到水穷处，坐看云起时
4楼2014-09-25 22:44:50
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好兵德克

新虫 (初入文坛)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-09-27 10:49:23
我也觉得可能是抗生素压力小了
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5楼2014-09-26 08:59:24
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刘芬玲

金虫 (初入文坛)
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检查一下抗生素的活性
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6楼2014-09-26 15:23:39
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采英姿

银虫 (初入文坛)
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-09-27 10:49:32
gyesang: 回帖置顶 2014-09-27 10:49:34
一是可能你在平板中长的时间太长，长出来的估计就是杂菌了；然后就是考虑抗生素的问题；还有就是你在提取的时候，我不知道你用的是哪一种提取试剂，一般的都是要DNA wash buffer和HBC buffer中加入乙醇或异丙醇，没加的话质粒的溶解度增加，估计就直接洗掉了（我们实验室有人犯过这样的错误）。
个人意见仅供参考！
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雨后的青山像泪洗过的良心！爱我所爱，恨我所恨！
7楼2014-09-27 08:44:20
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