应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Taqman荧光定量PCR跑出来的曲线出现了各种问题，不知问题出在哪儿
71/1返回列表
查看: 3408  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

[求助] Taqman荧光定量PCR跑出来的曲线出现了各种问题，不知问题出在哪儿 已有3人参与

本人最近在做探针法荧光定量RT-PCR,但是跑出来的图形各种奇怪。我不知道问题出在了哪里，该怎样分析和改进？望善良智慧的虫友们能帮我分析分析，提提意见！我在此谢谢大家了！

Taqman荧光定量PCR跑出来的曲线出现了各种问题，不知问题出在哪儿
Y6939A%KI5I7{301W%`6R%G.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-23 21:57:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
胡琴HuQin(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-24 09:16:29
你用的什么酶啊? 怎么扩得这么快,然后低拷贝的标准品都扩不出来(你的标准是5个点还是6个, 怎么看起来只有3个标准? 你的重复3次的标准点是哪个?).
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-24 01:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xipha at 2014-09-24 01:24:28
你用的什么酶啊? 怎么扩得这么快,然后低拷贝的标准品都扩不出来(你的标准是5个点还是6个, 怎么看起来只有3个标准? 你的重复3次的标准点是哪个?).

我是一步法荧光定量RT-PCR.图中是设了8个模版浓度梯度，没有设置重复。用的宝生物一步法试剂盒。我觉得自己图中曲线还有问题，就是荧光值怎么那么低呢？还有就是我想请问一下FAM标记的荧光探针溶于稀释液后是什么溶液是什么颜色啊？是浅棕色的吗？
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-24 07:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
胡琴HuQin: 金币+3 2014-09-24 20:09:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by 胡琴HuQin at 2014-09-24 07:15:19
我是一步法荧光定量RT-PCR.图中是设了8个模版浓度梯度，没有设置重复。用的宝生物一步法试剂盒。我觉得自己图中曲线还有问题，就是荧光值怎么那么低呢？还有就是我想请问一下FAM标记的荧光探针溶于稀释液后是什么溶 ...

不好意思我没有用过FAM标记. 这个图看着有点摸不着头脑,也不知道是哪里的问题. 不过你的样品如果在标准曲线的线性区那也就无所谓了,另外你能把扩增效率曲线做一下看看扩增效率么(Ct/quantity)?还有就是如果低浓度的标曲拉不开的话,你批一个高浓度系列的表曲试试扩增效率. 看看是不是就是目标浓度低于检测体系灵敏度了. 不过一般做低浓度标曲都会有一个起飞Ct高于25的标准点的.
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-24 10:32:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xipha at 2014-09-24 10:32:26
不好意思我没有用过FAM标记. 这个图看着有点摸不着头脑,也不知道是哪里的问题. 不过你的样品如果在标准曲线的线性区那也就无所谓了,另外你能把扩增效率曲线做一下看看扩增效率么(Ct/quantity)?还有就是如果低浓度的 ...

嗯，谢谢！
回复此楼
5楼2014-09-24 20:09:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
胡琴HuQin(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-20 12:02:01
也没看出来你的问题在哪里，你的问题出现在哪里
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-20 11:46:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做定量 一定要设置重复
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-20 13:30:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 胡琴HuQin 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 086003食品工程求调剂 +5 淼淼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 20:53 by lailaisimei
[考研] 招08考数学 +7 laoshidan 2026-03-20 16/800 2026-03-24 17:52 by 乌拉儿山脉
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 293求调剂 +6 加一一九 2026-03-24 6/300 2026-03-24 14:29 by JourneyLucky
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭