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Genome Walking 的准确性,片段连接上但不一定是对的?
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最近做染色体步移扩增未知序列,出现一些匪夷所思的问题想和各位高手探讨一下. 比如通过TAKARA walking的试剂盒扩增出来的两个片段能与已知的片段拼接上(至少160+bp是重的),按道理这两个片段都是对的,但这两个片段(长度不一样)进行比对的时候,可能前面400是重叠的后面就不一样了,还有的是只有中间不对,还有的是只与原已知序列拼接上的那部分序列是重叠的,后面就不对了... 不知道这是什么情况,现在怀疑walking的准确性,到底得到的哪个片段才是真的? 不知道我讲清楚没有,希望有高手能够解答一下   walking 序列对比图.PNG |
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3楼2018-05-03 14:49:06
Cynthiaxin
金虫 (小有名气)
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2楼2014-09-21 02:00:34
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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你的估计是P出来错误序列了，楼主的那个可能是两个同源基因。建议你重新做吧，takara genmone walking克隆需要运气，重点在于引物的设计，还有一些其他的克隆方法你可以试试， 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-05-03 17:40:02