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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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薛虹妮

银虫 (小有名气)

[求助] western blot 转膜转成花的了 求问这是为什么 已有7人参与

蛋白胶跑完之后进行湿转，恒流250mA ，pvdf膜，两个半小时之后拿出来就成这鬼样子了有木有那位虫虫晓得原因啊，是不是因为气泡呢？？

western blot 转膜转成花的了 求问这是为什么
IMG_20140915_211737.jpg
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1楼 2014-09-15 21:26:45
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馋虫木木

新虫 (初入文坛)
你好，如果你想要的目的蛋白条带大小在70kb以下的话，我建议转膜条件改为200mA，2小时比较好。而且转膜时一定要注意在有转膜液的槽子里进行（液体最浅要没过第一层吸水纸和胶）先把吸水纸放好用玻璃棒擀平，然后放好胶，再用玻璃棒赶平，再把膜放上，最好从一层慢慢下放到另一侧，这时胶上最好有一定量的转膜液，可以有效减少气泡。然后放上吸水纸，再赶平，再加海绵。家的时候一定要对齐加紧！
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11楼2014-09-22 20:05:46
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xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
薛虹妮: 金币+1, ★有帮助 2014-09-16 00:14:22
看起来很像是一个大气泡, 你有给转膜系统降温么?
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2楼2014-09-15 22:42:47
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薛虹妮

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xipha at 2014-09-15 22:42:47
看起来很像是一个大气泡, 你有给转膜系统降温么?

有啊，放在大只的冰盒里面做的，槽子里还放了冰袋~~就想说除了气泡之外还有没有别的可能造成这种结果的原因。问了好多人都不清楚。
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3楼2014-09-16 00:14:13
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xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
薛虹妮: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-16 11:54:48
别的原因可以是转膜时胶没有放好(气泡), 电压/电流太高(过热气泡) , 转膜液没有加够(气泡), ...其它的一时想不起来. 言归正传, 再有就是你下次做的时候同时跑两块胶, 一块转膜一块考染, 然后你就能排除样品上可能的问题.
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4楼2014-09-16 08:23:33
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