应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问各位大神们，克隆基因仅仅拿到了ORF还需要继续克隆5’和3’UTR吗？
51/1返回列表
查看: 1867  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sunhainan666

银虫 (小有名气)

[求助] 请问各位大神们，克隆基因仅仅拿到了ORF还需要继续克隆5’和3’UTR吗？ 已有2人参与

进行基因功的研究，可能会构建超表达载体转拟南芥和其他植物。
后期还可能做到转录因子和这个基因启动子的互作情况！
请问各位因为直接从转录组中拿到的序列，拿到转录组序列后找到ORF后blastX发现是全场ORF，是不是直接可以高保真酶拿全长ORF呢？还是要一步一步中间片段，3’ 5’慢慢做呢？如果直接高保真拿到了ORF全长，就我以后要做的这些实验，有没有必要继续克隆5‘和3’ UTR？
小弟初入分子生物学，还请大神们多多指教！不胜感激~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
最美的不是下雨天，是曾和你一起躲雨的屋檐
1楼 2014-09-13 00:22:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioplant

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
sunhainan666: 金币+7, ★★★★★最佳答案, 多谢 2014-09-18 14:44:07
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunhainan666 at 2014-09-13 12:14:55
也就是说只要我拿到的序列中包含全长ORF就可以了，5’不需要一直往前克隆到帽子结构，3’一直往后到poly A尾巴？...

关键是后续研究能否在己得到的序列上设计合适的引物，能则幸运，不能RACE，不能则需RACE。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-15 06:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

bioplant

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunhainan666(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-14 09:26:53
只要能设计引物扩增出该ORF，则功能研究不需5‘3‘扩；若需启动子则通常需做5‘-RACE，除非ORF也能设计幸运的引物。3‘可不做，除非该类基因3‘有增强子等调控序列。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-09-13 07:56:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sunhainan666(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-14 09:27:02
应该说分析是不用的，但克隆的时候一般不能直接是ORF的，直接ORF扩增不大好扩，也容易出现错误，一般没那么好运气，我们就在5‘和3’设计合适引物。
至于后面要做什么启动子什么的后面再弄，那个比基因克隆麻烦的多
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-13 10:35:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunhainan666

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bioplant at 2014-09-13 07:56:52
只要能设计引物扩增出该ORF，则功能研究不需5‘3‘扩；若需启动子则通常需做5‘-RACE，除非ORF也能设计幸运的引物。3‘可不做，除非该类基因3‘有增强子等调控序列。

也就是说只要我拿到的序列中包含全长ORF就可以了，5’不需要一直往前克隆到帽子结构，3’一直往后到poly A尾巴？
赞一下 回复此楼
最美的不是下雨天，是曾和你一起躲雨的屋檐
4楼2014-09-13 12:14:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +6 瞬息宇宙 2026-08-31 12/600 2026-09-02 10:49 by 瞬息宇宙
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +4 瞬息宇宙 2026-09-01 8/400 2026-09-02 10:35 by 瞬息宇宙
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭