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a479967958

铜虫 (著名写手)

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[求助] 计数所得藻密度和紫外可见吸光度值不成线性，如何解决?

每天计数、测吸光度各一次，现在得到6对数据，做了一下散点图，毫无头绪，不知道问题出在哪，请懂的人帮忙分析分析，多谢啦~~
计数：细胞初始密度是2~3*10^4，用血球计数板4*4*25的计数区，每次吹打摇匀细胞悬浊液仍在转动的时候用100uL取样，记录上下两室的计数区细胞总数，剩余悬浊液打回（样品总量是5ml）；样品计数7次，去掉较低和较高异常值，剩下求平均，如此得到细胞密度。计数的原则是左上边压线者计入、团聚体根据可见细胞数，一般计1个，较多时计2个或3个（取一次样，上下两室总共能看到1~2个团聚）。
Abs：按照方法设定(波长、样品重复读数3次)→自动调零→读取样品的常规步骤，先用培养液自动调零，然后换细胞悬浊液，润洗时将培养液倒掉→倒扣吸水→约2ml藻液润洗→倒扣吸水→加藻液→轻轻吹打混匀→立即摁F9测吸光度，每次取样前仍充分混匀。
PS：1、虽说充分混匀，但仍有一小部分细胞团聚在一起，因担心吹打用力过度会破坏细胞，所以允许那一小部分细胞团聚；
      2、测吸光度时，第一次测定完毕后，让比色皿在样品池停留一小段时间，吸光度不会改变，表明分散的细胞短时间内不会因为沉降改变吸光度；
      3、之前用梯度稀释的方法，一次性测5个浓度的吸光度，做出的标曲线性相关度特别高，接近1（做了3次吧，但是3次的数据合起作图来之后相关性下降了），不过上述测定将波长换成了全波段扫描得到的特征峰波长。
      4、假如能够做出相关性>0.9的标准曲线，是不是以后做实验的时候就可以只测吸光度？

因为样品组别设置比较多，而且又有3个平行，一个个数会数死的。。
看图的话，计数所得的曲线比较符合常理（适应→对数），而Abs就有点怪，这难道是紫外可见分光光度计不稳定？

话说实验室这台仪器（岛津UV-2401）是有点年份了。。还是那一小部分细胞团聚惹的祸？
有点长，烦请不吝指点

散点图V1.png

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1楼 2014-09-09 11:14:44

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a479967958

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引用回帖:

4楼: Originally posted by HarveyWang at 2014-09-10 16:22:45
你的试验吸光值下限有问题，太低了。仪器没这么灵敏的。

测菌体光密度，线性范围的上限和下限，你需要自己试验确定。一般，在0.02---0.5范围内均有很好的线性。在0.02以下，或1.00以上，线性均不好。

这同其他 ...

原来问题在这，谢谢！