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childchou

银虫 (小有名气)

[求助] 胶回收时跑不出条带 已有18人参与

小弟做基因克隆,PCR后跑电泳观察,上样量4ul,跑出的条带很亮,而且片段大小正确1000bp,然后进行胶回收,把4管PCR产物混一起,每个胶孔上样40ul,跑电泳后发现目的片段处没有条带,反而在100-200bp大小处出现很亮的条带,应该是引物二聚体,想请教下各位大神,这是为什么呀!用的染料是goldview,胶染法。急急急急急!!!!!
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boomshakalaka
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childchou

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by bwangel at 2014-09-08 08:17:58
不用EB,胶回收应该非常亮的,如果GV看不见就重弄吧,估计是你提取的问题

PCR体系是20ul的,跑完pcr后吸4ul 跑胶看下,发现条带很亮而且大小正确,然后就把剩下的混在一起,放到大孔胶中跑,每个孔大概加了40ul,然后电泳玩后,就没有发现在目的片段大小处的条带,而且出现了很亮的引物二聚体条带。
boomshakalaka
33楼2014-09-09 09:53:46
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tangjiguoice

木虫 (著名写手)


childchou(金币+1): 谢谢参与
得金币了,说声谢谢!
2楼2014-09-07 21:09:20
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childchou

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tangjiguoice at 2014-09-07 21:09:20
得金币了,说声谢谢!

给点建议啊!亲
boomshakalaka
3楼2014-09-07 21:18:27
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人偶骑士

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-08 16:19:12
换EB试试,我之前用其它染色剂也出现了很多问题,换了EB就没了
道之所在,虽千万人吾往矣!
5楼2014-09-07 21:27:07
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