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lu12306

新虫 (初入文坛)

[求助] 用基因组DNA扩增某个基因效率怎样? 已有1人参与

最近一直在做提取DNA直接以DNA作为PCR模板扩增目的基因,设退货温度梯度,一直没扩增出来。郁闷呀!
这与提RNA反转录作PCR模板有什么区别吗?比如说扩增效率方面,是不是以含内含子的DNA为模板PCR效率低,难扩增。
还有就是就算以DNA为模板扩增出基因,是不是还得提RNA反转录扩增验证呀?
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lu12306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by eulota at 2014-09-11 08:20:48
看你的题目回答:
基因组DNA扩增的效率取决于多个方面,但主要有:
1. 基因组的一级结构,比如GC含量,比如重复序列等都会极大影响扩增;
2. 基因组的长度,如果超过5k,则需要注意用比较好的一点的Taq酶进行扩增 ...

我们老师让我以基因组为模板扩增目的基因,然后将构建表达载体,转化,遗传分析。我担心的是基因中有内含子,基因片段太大,不容易转化。我看的文献几乎都是以cDNA为模板克隆基因,只有一篇以基因组为模板,并且这篇还没有做出结果。我想问的是以基因组为模板扩增目的基因,然后将构建表达载体,转化,遗传分析,这样是否可行?
3楼2014-09-11 14:49:02
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eulota

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lu12306(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-11 09:23:29
看你的题目回答:
基因组DNA扩增的效率取决于多个方面,但主要有:
1. 基因组的一级结构,比如GC含量,比如重复序列等都会极大影响扩增;
2. 基因组的长度,如果超过5k,则需要注意用比较好的一点的Taq酶进行扩增反应。

看你的内容回答:
通常来说,cDNA做模版肯定要效率高些,因为没有内含子,但两种方式的目的是完全不一样的,不知道你要做什么?
你说的用基因组扩增后还要用RNA验证,恕不知道你在表达什么,通常没有你这样的说法。
2楼2014-09-11 08:20:48
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